重組pcdna3.1hbmp2轉(zhuǎn)染兔adscs體外誘導(dǎo)成骨分化的實(shí)驗(yàn)研究

1、遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文重組pcDNA3.1-hBMP-2轉(zhuǎn)染兔ADSCs體外誘導(dǎo)成骨分化的實(shí)驗(yàn)研究姓名：劉凡凡申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)（骨）指導(dǎo)教師：安榮澤20100401遵義醫(yī)學(xué)院研究生乍業(yè)論文 章組p c D N A 3 ．卜h B M P - 2 轉(zhuǎn)染免A D S C s 體外誘導(dǎo)成骨分化的實(shí)驗(yàn)研究基兇轉(zhuǎn)染對(duì)脂肪干細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖無(wú)明顯影響。3 、連續(xù)三天細(xì)胞培養(yǎng)上清液h B M P ．2 E L I S A 檢測(cè)表明h B

2、 M P ．2 組在第3 天、第7 天、第l 4 天、第2 1 天時(shí)的h B M P ．2 表達(dá)量均高于相應(yīng)時(shí)段的E G F P 組及未轉(zhuǎn)染組( 組間p0 ．0 5 ) 。根據(jù)h B M P ．2 標(biāo)準(zhǔn)蛋白曲線換算，在上述培養(yǎng)時(shí)段內(nèi)，h B M P ．2 組細(xì)胞上清液中的h B M P ．2 含量約l2 ．36 n g h B M P ．2 ( 細(xì)胞接種濃度8 X 10 4 個(gè)／孔) 。4 、成骨分化指標(biāo)：I 型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示

3、h B M P ．2 組細(xì)胞內(nèi)表達(dá)出I 型膠原，均高于E G F P 組及未轉(zhuǎn)染組( p < 0 ．0 5 ) ；經(jīng)堿性磷酸酶活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)各組細(xì)胞不同時(shí)段上清液中的A L P 活性發(fā)現(xiàn)h B M P ．2 組均較E G F P 組及未轉(zhuǎn)染組高( 組間p < 0 ．0 5 ) ；且隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)h B M P ．2 組A L P 的活性逐漸增強(qiáng)( 組內(nèi)p < 0 ．0 5 ) ；2 ％茜素紅對(duì)轉(zhuǎn)染后連續(xù)培養(yǎng)1 4

4、天的細(xì)胞進(jìn)行鈣結(jié)節(jié)染色發(fā)現(xiàn)僅h B M P ．2 組有較多橘紅色結(jié)節(jié)，而E G F P 組及未轉(zhuǎn)染組無(wú)明顯發(fā)現(xiàn)。結(jié)論：成功構(gòu)建了h B M P ．2 基因的真核表達(dá)載體一重組p c D N A 3 ．1 ．h B M P ．2 質(zhì)粒；利用脂質(zhì)體L i p o f e c t a m i n e T M 2 0 0 0 可以介導(dǎo)h B M P ．2 基因成功轉(zhuǎn)染A D S C s ，并對(duì)A D S C s 的生長(zhǎng)、增殖無(wú)明顯影響，并可通過(guò)