翅鱗傘(pholiotasquarrosa)as5.245胞內(nèi)蛋白pspb2的分離純化及其生物學(xué)活性的研究

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文翅鱗傘（Pholiota squarrosa）AS5.245胞內(nèi)蛋白PSPB-2的分離純化及其生物學(xué)活性的研究姓名：汪建敏申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：發(fā)酵工程指導(dǎo)教師：陸兆新20080601一 莖苧塑壅 一．—— _ —- ——_ _ ————●————_ —_ —_ —_ - ●’—- _ _ - —- ————_ ———_ —- ●- _ _ ———_ ————————_ - _ —————————一一P U R

2、 I F I C A T I O T A N D C H A R A C T E R I Z A T I O N O FI N T R A C E L L U L A R P R O T E I N P S P B ·- 2F R O M P H L I O T A S Q U A R R O S A A S 5 ．2 4 5A b s t r a c tA t p r e s e n t ，c a n c e r sh a

3、v e s t i l lb e e no n eo f t h ei m p o r t a n t f a c t o r si nh u m a nd e a t h ．T h en 池t r e a t m e n tm e t h o d o l o g i e st ot u m o r si n c l u d eo p e r a t i o n , c h e m o t h e r a p y , r a d i o

4、 t h e r a p y ,w 缸c h i no n e s i d eb r i n g h o p e s a n d o n t h e o t h e r s i d e i n d u c ev a r i o u s i n j u r i e st op a t i e n t s ·A n dt h es i d ee f f e c t so f c h e m o t h e r a p y , r

5、a d i o t h e r a p y a r e m u c h b i g g e rt op o s t p o n et h er e c o v e r y ．n l e r c f o r e h i 幽a t t e n t i o n h a sb e e n p a i d r e c e n t l yi nt h e f i e l d so f b i o l o g y a n d m e d i n e

6、t os e l e c tn e w d r u g s ．e s p e c i a l l y n a t u r a l m e d i c i n e s w i t h h i 曲e Te f f i c i e n c y , l o w e r t o x i c i t ya n d l o w c o s t ·P h D l i D t a s q u a r r o s ai s m y c e l i

7、 u m o ff b 畫，w h i c h b e l o n g st o B a s i d i o m y c o t i n a ，翰腳P 玎o m y c e t e , A g a r i c a l e s , S t r o p h a r i a c e a e , P h o l i o t a 7 陬) k u m m ．A tp r e s e n t t h e r e I S n or ℃s e a r

8、c h i n 也ea n t i t u m o r a c t i v i t y o fP h o l i o t a s q u a r r o s a ．I nt h i s s t u d yw a t e r - s o l u b l ep r o t e i l l s f r o mP h o l i o t a s q u a r r o s ab yf e m t a t i o nh a v e b e e n

9、 i s o l a t e d a n di t s b i o l o g i c a la c t i v i t i e sh a v e b e e n s t u d i e d ．1 ：A c c o r d i n g t o t h e P y r i c u I a r i a o r y z a eb i o a c t i v i t ym e t h o d ，W eb u i l dR h i z o c t

10、 o n i aJ D j 口挖jb i o a c t i v i t ym e t h o d ．T h ea c t i v i t ys u b s t a n c eo f P h o l i o t as q u a r r o s a h a v eb e e ns t u d i e dg u i d e d b y R h i z o c t o n i a s o l a n i b i o a c t i v i

11、t ym e t h o d ．2 ：T h e p r o t e i n s w a sp u r i f i e d b y a m m o n i u m s u l f a t e p r e c i p i t a t i o n , i o ne x c h a n g eC ] 由．o m a t o g r a p h y a n dg e lf i l t r a t i o n ，S D S - P A G E e

12、 l e c t r o p h o r e s i s o ft h e p u r i f i e d f r a c t i o nm i t i g a t e da s i m p l eb a n d ，T h em o l e c u l a r w e i g h t o f t h ee n z y m e W a s 3 8 ．2 8 K D a T h e p u r i f i e dp r o t e i nh

13、 a v em a r k a b l e a n t i p r o l i f e r a t i v e a c t i v i t y ．I n v i t r o ，t h e a n t i p r o l i f e m t i v e a c t i v i t y幻毗帕f z l 7 刁甜c e l l sA 5 4 9 c e i l si n d u c e db yP h o l i o t as q u a r

14、 r o s a p r o t e i n sw e r ea s s a y i e d 髓ma n t i p r o l i f e r a t i v em e t h o d ，w h e n c o n t a i n s 2 0p 影m Lp r o t e i n st h e g r o w t h i n h i b i t i o nw a sh i g h e r t h a n 6 5 ％．3 ：T h es

15、 t u d ys h o w s t h a t t h e p r o t e i n sp u r i f i e df r o mP h o l i o t as q u a r r o s ac a ni n d u c ec a n c e rc e l l a p o p t o s i s ．W eu s e d J C ．1 f o ri n - s i t u d e t e c t i o no fm i t o

16、c h o n d r i a l m e m b r a n et r a n s i t i o ne v e n t si n l i v ec e l l s ，w h i c hp r o v i d e s a l le a r l y i n d i c a t i o no f t h ei n i t i a t i o no f c e l l u l a ra p o p t o s i s ．T h e c o

17、l l a p s e i n t h e e l e c t r o c h e m i c a l g r a d i e n t a c r o s s t h e i n i t o c h o n d r i a tm e m b 舢e ．w e f o u n d t h ep r o t e i n sC a l li n d u c ec o l l a p s eo f m i t o c h o n d r i a