南極適冷菌pseudoalteromonassp.s1513胞外多糖的研究

1、、， 盥8 3 罩露鞲努蘩4 ；???～，攮臻 l i 蹴一——? ⑧研究生學(xué)位論文南極透冷麓P s e u d o a i t e r o r 黼n a s 霪覯3 一螨一褥胞給器糖齙酶究臻凇徽踅一。，一囊 i 薹蔣蹬舔自馘致囊畿豢照蕊一，。髓轟亟煎一撰?翔釋覯酬。。壤。．耋，| ¨錯(cuò)能受囂耕陽矧4 2 S 獺夔壁爨魏蛋辯撩F f } 薅：趟。蕉l 昱孛渤海洋走攀南極適冷營P s e u d o a l t e r o m

2、o n a s s p S - 1 5 - 1 3 胞外多糖的研究單胞菌是南極生態(tài)系統(tǒng)中最常見也是很重要的一類細(xì)菌，所以對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的研究。南極海洋菌P s e u d o a l t e r m o n a ss p ．S - 1 5 —1 3 的外形觀測(cè)結(jié)果為：細(xì)胞呈桿狀，長度為1 ．O X 2 ．8 ( p m ) ，極生鞭毛可以運(yùn)動(dòng)。生理生化鑒定結(jié)果表明，南極海洋菌P s e u d o a l t e r m o n a s

3、s p ．S - 1 5 —1 3 革蘭氏染色陰性，兼性厭氧，氧化酶、接觸酶、尿素酶、賴氨酸脫羧酶、精氨酸脫羧酶、精氨酸雙水解酶反應(yīng)里陽性；硝酸鹽還原反應(yīng)、吲哚試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)、H 2 S 試驗(yàn)、非試驗(yàn)、v P 試驗(yàn)、O N P G試驗(yàn)、鳥氨酸脫羧酶反應(yīng)均呈陰性。2 ．對(duì)南極海洋菌S - 1 5 - 1 3 的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件進(jìn)行的研究結(jié)果表明，南極海洋菌S - 1 5 - 1 3 可以產(chǎn)生胞外多糖，最佳產(chǎn)糖條件為：培養(yǎng)時(shí)間，5 6 h

4、 ；溫度，8 “ C ；最佳碳源，濃度為1 ％的葡萄糖：最侶t N a C l 濃度，3 ％；最佳p H 值6 - 7 。試驗(yàn)結(jié)果表明，南極海洋菌在4 ～2 5 “ C 下均能正常生長，因此確定該菌為適冷菌，即南極適冷菌s 一1 5 ．1 3 。I O O L 發(fā)酵罐結(jié)果表明，可以利用外接冰水作為循環(huán)水來控制發(fā)酵罐內(nèi)溫度，從而保證南極適冷菌} 1 5 一1 3 正常生長，其它條件與實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件大體相同，胞外多糖的產(chǎn)量與實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵相比有

5、所提高。3 ．南極適冷菌s 一1 5 —1 3 發(fā)酵液經(jīng)乙醇沉淀、去蛋白后獲得粗多糖。多糖粗品經(jīng)D E A E - S e p h a d e xA - 5 0 離子交換層析初分獲得兩個(gè)組分E P S —I 和E P S - I I ，分別經(jīng)S e p h a d e xG ．10 0 凝膠層析進(jìn)一步純化，均獲得對(duì)稱的單一峰。冷凍干燥的樣品經(jīng)碘．碘化鉀反應(yīng)、雙縮脲反應(yīng)、a ．萘酚顯色( M o l i s h ) 反應(yīng)、u v 以及H

6、P L C檢測(cè)，無蛋白、核酸、小肽及其它雜質(zhì)存在；表明樣品純度較高，符合進(jìn)一步分析和研究的要求。以高效凝膠滲透色譜( H P ．G P c ) 測(cè)定兩個(gè)多糖組分E P S - I 和E P S - 1 1 分子量分別為：2 3 k D a 和6 2 k D a 。4 ．對(duì)南極適冷菌S - 1 5 —1 3 胞外多糖的單糖組成以及結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。G c 分析結(jié)果表明，胞外多糖E P S —I 由D 一甘露糖、D - 葡萄糖和D _ 半乳糖組