09t-i660-01細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法(一部)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、1.目的：目的：建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法(一部)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，并按規(guī)程進(jìn)行檢驗(yàn)，保證檢驗(yàn)操作規(guī)范化。2.依據(jù)：依據(jù)：2.1.《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部。3.范圍范圍：適用于所有用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法(一部)測(cè)定的供試品。4.責(zé)任責(zé)任：檢驗(yàn)員、質(zhì)量控制科主任、質(zhì)量管理部經(jīng)理對(duì)本規(guī)程負(fù)責(zé)。5.正文：正文：5.1.本法系利用鱟試劑來(lái)檢測(cè)或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。5.1.1

2、.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查包括兩種方法，即凝膠法和光度測(cè)定法，后者包括濁度法和顯色基質(zhì)法。供試品檢測(cè)時(shí)，可使用其中任何一種方法進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)測(cè)定結(jié)果有爭(zhēng)議時(shí)，除另有規(guī)定外，以凝膠法結(jié)果為準(zhǔn)。本試驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)防止微生物和內(nèi)毒素的污染。5.1.2.細(xì)菌內(nèi)毒素的量用內(nèi)毒素單位(EU)表示，1EU與1個(gè)內(nèi)毒素國(guó)際單位（IU）相當(dāng)。5.1.3.細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品系自大腸埃希菌提取精制而成。用于標(biāo)定、復(fù)核、仲裁鱟試劑靈敏度和標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià)。5

3、.1.4.細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品系以細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)標(biāo)定其效價(jià)，用于試驗(yàn)中鱟試劑靈敏度復(fù)核、干擾試驗(yàn)及各種陽(yáng)性對(duì)照。5.1.5.凝膠法細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水系指內(nèi)毒素含量小于0.015EUml（用于凝膠法）或0.005EUml（用于光度測(cè)定法）且對(duì)內(nèi)毒素試驗(yàn)無(wú)干擾作用的滅菌注射用水。5.4.2.C為供試品溶液的濃度，當(dāng)L以EUml表示時(shí)，則C等于1.0mlml，當(dāng)L以EUmg或EUU表示時(shí)，C的單位需為mgml或Uml。如供試品為注

4、射用無(wú)菌粉末或原料藥，則MVD取1，可計(jì)算供試品的最小有效稀釋濃度C=λL；5.4.3.λ為在凝膠法中鱟試劑的標(biāo)示靈敏度（EUml），或是在光度測(cè)定法中所使用的標(biāo)準(zhǔn)曲線上最低的內(nèi)毒素濃度。5.5.方法1：凝膠法。5.5.1.凝膠法系通過(guò)鱟試劑與內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理來(lái)檢測(cè)或半定量?jī)?nèi)毒素的方法。5.5.2.鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)：在本檢查法規(guī)定的條件下，使鱟試劑產(chǎn)生凝集的內(nèi)毒素的最低濃度即為鱟試劑的標(biāo)示靈敏度，用EUml表示。當(dāng)使用新批號(hào)

5、的鱟試劑或試驗(yàn)條件發(fā)生了任何可能影響檢驗(yàn)結(jié)果的改變時(shí)，應(yīng)進(jìn)行鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)。5.5.3.根據(jù)鱟試劑靈敏度的標(biāo)示值(λ)將細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水溶解，在旋渦混合器上混合15分鐘，然后制成2.0λ、λ、0.5λ和0.25λ四個(gè)濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混勻30秒鐘。取分裝有0.1ml鱟試劑溶液的10mm75mm試管或復(fù)溶后的0.1ml支規(guī)格的鱟試劑原安瓿18支，其中16管

6、分別加入0.lml不同濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，每一個(gè)內(nèi)毒素濃度平行做4管；另外2管加入0.1ml細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水作為陰性對(duì)照。將試管中溶液輕輕混勻后，封閉管口，垂直放入37℃1℃的恒溫器中，保溫60分鐘2分鐘。5.5.4.將試管從恒溫器中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)180，若管內(nèi)形成凝膠，并且凝膠不變形、不從管壁滑脫者為陰性；未形成凝膠或形成的凝膠不堅(jiān)實(shí)、變形并從管壁滑脫者為陰性。保溫和拿取試管過(guò)程應(yīng)避免受到振動(dòng)造成假陰性結(jié)果。5.5.5.當(dāng)最大