分子細胞遺傳學(xué)新進展ppt課件

1、分子細胞遺傳學(xué)新進展,,1,傳統(tǒng)的遺傳學(xué),60年代早期局限于計算染色體的數(shù)目粗略的將染色體按照大小和著絲粒位置進行區(qū)分( groups A to G)1970年顯帶技術(shù)的建立清楚的分辨出46條染色體,2,細胞遺傳學(xué)的一般步驟,細胞培養(yǎng)使細胞停留在分裂中期低滲的方法使細胞膨大固定染色體，保留核酸將細胞滴到玻片上用顯帶染色技術(shù)進行染色在熒光顯微鏡下分析染色體數(shù)20個中期分裂相進行分析常規(guī)研究方法可區(qū)分400-600

2、條帶高分辨率研究方法可區(qū)分>650條帶,3,有絲分裂—中期的核型分析,,4,染色體組核型分析,G-帶 (Giemsa)富含AT的區(qū)域顏色較深優(yōu)點能看到整個基因組顯示每一單個染色體缺點分辨率(5-10Mb)進行細胞培養(yǎng)其他會用到的核型分析技術(shù)R, Q, C, 和 NOR 帶,5,染色體異常數(shù)目改變,三倍體 和 四倍體 非整倍體+21, +18, +13, XO, XXY, 等,6,染色體異常結(jié)構(gòu)異常,平衡

3、改變易位和 倒位不平衡改變 缺失, 擴增, 環(huán)狀染色體, 和等臂染色體,7,倒位,8,染色體缺失,缺失看得見的識別起來相對容易微缺失看不見識別起來不是很容易,9,基因組大小和分辨率,10,分子細胞遺傳學(xué) 熒光原位雜交技術(shù) (FISH)多色 FISH (SKY 和 M—FISH）比較基因組雜交 (CGH）基因微陣列 (aCGH),11,,熒光原位雜交（Fluorescence in situ Hybridi

4、zation，F(xiàn)ISH）,基本原理：應(yīng)用熒光染料標記探針DNA，變性成單鏈后與變性后的染色體或細胞核靶DNA雜交，在熒光顯微鏡下觀察并記錄結(jié)果。,生命科學(xué)中的“釣魚” 技術(shù),12,,,13,FISH技術(shù)的特點,操作簡便，探針標記后穩(wěn)定，可與多種技術(shù)結(jié)合，可成功地幫助細胞遺傳學(xué)家做出回顧性分析,方法敏感，能迅速得到結(jié)果，24小時就可以完成檢測,人員培訓(xùn)較快,標本來源豐富，間期細胞，分裂中期細胞、分化或未分化細胞及死亡或存活的細胞皆可以

5、被檢測,14,FISH在白血病及實體瘤中的應(yīng)用,,15,（1）診斷,,16,17,(2)微小殘留病灶檢測,18,檢測腫瘤細胞的常見方法,19,(3)預(yù)后,20,,21,,22,急性非淋巴細胞性白血病的預(yù)后分類,23,細胞遺傳學(xué)分類,24,(ASH Meeting, 2003; Abs:336),分子細胞遺傳學(xué)分類Favorable karyotype (15%) and/or CEBPA mutation, and no FLT3

6、mutationIntermediate karyotype (67%), or favorable karyotype with FLT3 mutation, and no RAS mutationPoor karyotype(18%), or intermediate karyotype with RAS mutation,25,慢性粒細胞性白血病,26,27,細胞遺傳學(xué)和/或 FISH檢測 t(9；22)(BCR/

7、ABL),FISH檢測ASS缺失,28,慢性淋巴細胞性白血病（慢淋）,是成人中常見的白血病有的慢淋病人只能存活幾個月，而有的病人則能生存超過20年目前的常規(guī)檢測手段(Rai and Binet)不能很好的預(yù)測病人的風險分子細胞遺傳學(xué)為預(yù)后提供關(guān)鍵參數(shù)信息 通過FISH檢測可確定病人所屬的預(yù)后組（依據(jù)平均生存月份劃分）32 (17p-)79 (11q-)111(normal)114 (+12q)133 (13q-),29

8、,結(jié) 論,Binet 分級, IgVH 突變 , CD38以及FISH都可獨立的作為慢性淋巴細胞性白血病的預(yù)后評價手段FISH 是一種有效且可靠的預(yù)測方法,30,多發(fā)性骨髓瘤,一種B細胞單克隆腫瘤 從漿細胞自我增殖演變而來 與異常蛋白生成及溶骨性損害相關(guān)中老年人群發(fā)病黑人及男性發(fā)病率高于白人及女性無法治愈對于不同發(fā)病風險的患者急需有效的治療方案,31,多發(fā)性骨髓瘤,標準的預(yù)后指標 (與預(yù)后有關(guān)) 血清 β2-微球蛋白C

9、-反應(yīng)蛋白 (CRP)骨髓漿細胞形態(tài)學(xué)漿細胞增殖 (漿細胞標記指標) 基因組標記 (非常重要 ),32,多發(fā)性骨髓瘤,應(yīng)用FISH方法確定的三個預(yù)后組 :預(yù)后差: t(4;14)(p16;q32); t(14;16)(q32;q23), 17p13- ( 24.7 個月)預(yù)后中等: 13q14- (42.3 個月)預(yù)后好: 其他 (50.5 個月),33,,成人急性淋巴細胞性白血病的預(yù)后分類Favorable risk

10、( median DFS >3 years)Normal or isolated 9p/p15-p16 deletionsIntermediate risk ( median DFS 19 months)6q deletions, hyperdiploidy, and miscellaneous aberrationsUnfavorable risk (median DFS 7 months)t(9;22)/BCR-A

11、BL, t(4;11)/MLL-AF4, and t(1;19)/E2A-PBX1,,34,,Favorable risk+4,+10, and +17 or t(12;21)(TEL/AML1)Unfavorable risk11q23(MLL) rearrangementsVery unfavorable riskHypodiploidy(< 45 chromosomes) or t(9;22)(BCR/ABL)O

12、thers,兒童急性淋巴細胞性白血病的 預(yù)后分類,35,熒光原位雜交技術(shù)在產(chǎn)前遺傳性疾病及部分腫瘤檢測的多中心臨床應(yīng)用研究,衛(wèi)生部科研基金課題 承擔單位衛(wèi)生部醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展研究中心分課題組長單位：北京大學(xué)人民醫(yī)院北京大學(xué)泌尿研究所醫(yī)科院腫瘤醫(yī)院北京婦產(chǎn)醫(yī)院等,36,國內(nèi)現(xiàn)狀,由于FISH探針及配套設(shè)備較貴，缺乏對該技術(shù)深入了解等原因，F(xiàn)ISH在國內(nèi)的推廣應(yīng)用受到很大的限制我國開展FISH檢測的現(xiàn)狀是不系統(tǒng)