海藻保健食品中的色素分析 -高 效 液 相 層 析 法

1、海藻保健食品中的色素分析- 高效液相層析法,,,分析實驗講義僅供校內(nèi)修課學生參考,分析實驗課即將結(jié)束囉~~,感謝大家互相體諒幫忙意見調(diào)查表課堂考試—筆記實驗報告討論報告補交6/8截止,海藻保健食品,從營養(yǎng)學的角度來看，綠藻至少提供消費者四大實用效益：A.供給豐富的鐵質(zhì)和維生素。B.天然綠色植物的膳食纖維。C.天然綠色植物的葉綠素、β-胡蘿蔔素和葉黃素。D.提供綠藻生長因子(CGF)及其他細胞代謝活動所需的輔因子。,海藻

2、體內(nèi)的脂溶性物質(zhì)具有抗癌活性。海藻脂溶性抗癌活性物質(zhì)主要來自類胡蘿蔔素。海藻含有豐富的類胡蘿蔔素，除有抑制癌細胞的活性外，還有清除活性氧及他種自由基，減少多種疾病的產(chǎn)生及減緩人體老化的速率。海藻的類胡蘿蔔素中以β－胡蘿蔔素及褐藻黃素最為重要從而海藻的抗癌研究轉(zhuǎn)向朝癌細胞發(fā)生前的保健預(yù)防方向考慮。,海藻中的抗氧化及抗癌色素,實驗?zāi)康?學習使用HPLC儀器進行定性定量工作學習如何從海藻保健食品中萃取色素以進行分析,葉綠素a標準品

3、,綠寶藻錠樣品,,定性分析 -滯留時間,2.4167 min,2.3833 min,定量分析 -積分面積,,系統(tǒng)組成,層析系統(tǒng)的兩個主要組成 - 固定相 (stationary phase) - 流動相 (mobile phase) 與固定相親和力大者，易留滯原地； 與流動相親和力大者，易隨流動相移動， 因而達成分離的目的。,HPLC的原理,欲分離的成份需先溶於溶劑中，然後在高壓下

4、注入分離管柱，樣品中的各個成份藉由移動相的帶動，滲透通過分離管柱中的固定相。各成份的移動度依其平衡分佈狀態(tài)而定 -成份和固定相之間的作用力小，很快沖堤出 -成份與固定相之間的作用力大，則較慢沖堤出。由於各成份與固定相的作用不同，造成移動速度的差異，因此產(chǎn)生分離效果。,HPLC之優(yōu)點,速度快解析能力高靈敏度大管柱可再使用,儲液器&溶劑處理系統(tǒng)高壓幫浦樣品注入系統(tǒng)分離系統(tǒng)偵測&記錄系統(tǒng)

5、,儀器裝置,,,,,儲液器&溶劑處理系統(tǒng)高壓幫浦樣品注入系統(tǒng)分離系統(tǒng)偵測&記錄系統(tǒng),儀器裝置,,儀器裝置- 固定相,儲液器&溶劑處理系統(tǒng)高壓幫浦樣品注入系統(tǒng)分離系統(tǒng)偵測&記錄系統(tǒng),,分析管柱： 3μm Shandon Hypersil® MOS2 C8(6.2-6.8% carbon)column, 120? pore size, 100x4.6 mm,儀器裝置- 移動相,,移動

6、型式：Isocratic / Gradient沖提液A：100% methanol註：使需用層析級試藥，移動相需以 0.2 ?m 濾紙過濾，並以氦氣脫氣,海藻保健食品色素萃取,綠藻錠-葉綠素a標示26.5mg/g?取4錠研磨成粉狀?秤取0.1g,?加10mL丙酮震盪萃取?離心取上清液?0.22um過濾?稀釋100倍

7、 完成,,,層析法分類,實驗流程,以丙酮進行海藻保健食品色素萃取以HPLC進行色素分離對照標準品以滯留時間(retention time)及全光譜圖進行波峰之定性對照標準品以濃度與積分面積進行樣品物中各色素的定量工作,,,,HPLC 高效能液相層析法High Performance Liquid Chromatography,高效能液相層析技術(shù)為分析技術(shù)中應(yīng)用

8、最廣泛的一種層析法。HPLC有多種分離模式，因此可廣泛的應(yīng)用於不同型態(tài)的化合物分析，其領(lǐng)域可適用於化學、化工、醫(yī)藥檢驗、農(nóng)化、環(huán)境檢驗、生化、食品飲料等各類樣品分析。,RP-HPLC,Reverse-phase C8 analytical column (RP HPLC) 極性較大者會先沖提出來，達到分離。,正相,逆相,液相層析管柱系統(tǒng),,定量分析 -積分面積,葉綠素a濃度比=積分面積比標準品 1 mg/L：樣品 x