血常規(guī)直方圖解析

1、血常規(guī)直方圖解析,,SYSMEX,一.電阻抗法血細(xì)胞分析儀檢測(cè)原理,血細(xì)胞與等滲電解質(zhì)溶液相比為相對(duì)的不良導(dǎo)體，其電阻值大于稀釋液的電阻值。當(dāng)血細(xì)胞通過(guò)檢測(cè)器小孔管微孔的孔徑感受區(qū)時(shí)，檢測(cè)器內(nèi)外電極之間的恒流源電路上電阻值瞬間增大，造成兩極之間電壓的變化，產(chǎn)生一個(gè)電壓脈沖信號(hào)。每次檢測(cè)中產(chǎn)生的脈沖信號(hào)數(shù)，即相當(dāng)于檢測(cè)出的細(xì)胞數(shù)。,操作時(shí)，位于小孔兩側(cè)的電極產(chǎn)生恒定電流。根據(jù)歐姆定律電壓變化與電阻變化成正比，電阻值又同細(xì)胞體積成正比，血細(xì)

2、胞體積越大，電壓越高，在甄別器上的脈沖幅度就越大，各種大小不同細(xì)胞產(chǎn)生的脈沖信號(hào)分別送入儀器內(nèi)電腦的各個(gè)通道，經(jīng)運(yùn)算得出各種細(xì)胞參數(shù)。目前，多數(shù)儀器在給出細(xì)胞數(shù)據(jù)結(jié)果的同時(shí)還提供細(xì)胞群體大小分布情況圖形，稱之為細(xì)胞體積直方圖。,血細(xì)胞分析儀在進(jìn)行細(xì)胞分析時(shí)，將每個(gè)細(xì)胞的脈沖根據(jù)其體積大小分配并存儲(chǔ)在相應(yīng)的體積通道中，每個(gè)通道收集的數(shù)據(jù)被統(tǒng)計(jì)出相對(duì)數(shù)，表示在Y軸上，體積數(shù)據(jù)以飛升(fl)為單位，表示在X軸上。可將白細(xì)胞體積從30～450f

3、l分為256個(gè)通道，每個(gè)通道1.64fl，依據(jù)體積大小分別將其放在不同的通道中，得到白細(xì)胞體積分布直方圖。初步確認(rèn)：第一群是小細(xì)胞區(qū)，主要是淋巴細(xì)胞，體積在35～90fl之間；第二群是中間細(xì)胞群，主要是單核細(xì)胞，體積在90～160fl，；第三群為大細(xì)胞區(qū)，主要是中性粒細(xì)胞，它分葉多，顆粒多，體積可大至160fl以上。,,Y,X,血小板和紅細(xì)胞共用一個(gè)小孔管。正常人紅細(xì)胞體積和血小板體積有明顯的界限。因此血小板計(jì)數(shù)準(zhǔn)確容易。當(dāng)血細(xì)胞懸液中

4、含有異常血細(xì)胞（如小紅細(xì)胞）時(shí)，劃分界限不清。為使血小板計(jì)數(shù)有較高的準(zhǔn)確性，計(jì)算機(jī)對(duì)血小板和紅細(xì)胞分布圖進(jìn)行判斷，將血小板計(jì)數(shù)的上限閾值判定線放在紅細(xì)胞和血小板分布圖交叉部分的最低處計(jì)數(shù) 。,二.白細(xì)胞直方圖解析,三分類的血液分析儀一般都以電阻抗原理進(jìn)行白細(xì)胞分類，儀器依據(jù)大多數(shù)正常形態(tài)的白細(xì)胞細(xì)胞在溶血素作用后的大小排列，人為設(shè)置了4個(gè)辨別線，將白細(xì)胞直方圖劃分三個(gè)區(qū)域，來(lái)辨別小白細(xì)胞、中白細(xì)胞和大白細(xì)胞。,1．白細(xì)胞直方圖的基本概念

5、,電阻抗原理 根據(jù)血細(xì)胞是非導(dǎo)電的性質(zhì)，懸浮在電解質(zhì)溶液中的血細(xì)胞顆粒，在通過(guò)檢測(cè)小孔時(shí)可引起電阻的變化為基礎(chǔ)，對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和體積測(cè)量。直方圖定義 以血細(xì)胞體積大小為橫座標(biāo)，不同體積的細(xì)胞出現(xiàn)的相對(duì)頻率為縱座標(biāo)，來(lái)描繪細(xì)胞群體分布情況的曲線圖形稱作血細(xì)胞直方圖。白細(xì)胞直方圖 在計(jì)數(shù)白細(xì)胞時(shí)，要加入溶血素使紅細(xì)胞破壞，此時(shí)白細(xì)胞膜受到破壞，細(xì)胞漿流失，使白細(xì)胞體積大小發(fā)現(xiàn)變化，因此需要強(qiáng)調(diào)的是在白細(xì)胞直方圖上細(xì)胞排列的順序不

6、是細(xì)胞的原始大小，而是經(jīng)溶血液修飾的細(xì)胞大小。,,圖1，加入溶血素前的細(xì)胞大小,N:10-14µmL:大12-15µm 小6-9µmM：12-20µmE:11-16µmB:10-12µm,RBC:平均7.2µmPLT：2-4µm,圖2.為加入溶血素后的細(xì)胞大小,←GRAN,,,RBC、PLT→,LYM→,MOEO→BASO,2．白細(xì)胞分

7、類原理,（一）辨別線的設(shè)置1.低辨別線（LD）： 在30至60fL之間自動(dòng)尋找最適位置.2.高辨別線（UD）：定在300fL ,用作粒度分布異常監(jiān)視。3.辨別線1（T1）： 自動(dòng)尋找從LD至UD之間白細(xì)胞分布曲線的波谷，第一波谷值設(shè)為“TROUGH”辨別線1（T1）.4. 辨別線2（T2）： 自動(dòng)尋找從LD至UD之間白細(xì)胞分布曲線的波谷，第二波谷值設(shè)為“TROUGH”辨別線2（T2）.,（二）辨別線的作用1.對(duì)正常形態(tài)的白細(xì)胞

8、進(jìn)行粒度分類 從以下兩圖可以直觀地看到白細(xì)胞分類情況,WL與T1之間為W-SCR％，相當(dāng)于LYM%；T1與T2之間為W-MCR%，相當(dāng)于MEX%單核、嗜酸、嗜堿T2與WU之間為W-LCR%，相當(dāng)于NEUT%。,2.監(jiān)視白細(xì)胞粒度分布的情況提供異常分布信息,白細(xì)胞粒度分布正常時(shí)，白細(xì)胞直方圖顯示三峰性分布，在低辨別線（LD）與高辨別線（UD）之間有兩個(gè)谷值（T1）和（T2）。當(dāng)谷值辨別線不能設(shè)定，或在設(shè)定的辨別線位置的度數(shù)比規(guī)定值

9、高時(shí)，將標(biāo)有白細(xì)胞粒度分布異常警號(hào)。下面將白細(xì)胞分布異常的警號(hào)按優(yōu)先順序來(lái)介紹，當(dāng)有兩個(gè)以上的警號(hào)符合時(shí)，將標(biāo)上優(yōu)先順序最高的警號(hào)。 1）WL：低辨別線（LD）的相對(duì)度數(shù)超過(guò)規(guī)定值?？赡艽嬖谘“寰奂蜉^多的巨大血小板。（2）T1：當(dāng)?shù)谝还戎挡荒軟Q定時(shí)。 （3）T2：當(dāng)?shù)诙戎挡荒軟Q定時(shí)。（4）F1：小白細(xì)胞分布異常。T1的相對(duì)度數(shù)超過(guò)規(guī)定值。（5）F2：中白細(xì)胞分布異常。T1或T2的相對(duì)度數(shù)超過(guò)規(guī)定值。（6）F3：大白

10、細(xì)胞分布異常。T2的相對(duì)度數(shù)超過(guò)規(guī)定值。（7）WU：高辨別線（UD）的相對(duì)度數(shù)超過(guò)規(guī)定值。可能為溶血不充分或存在較多的異常細(xì)胞所致。（8）AG：為小于LD的粒子數(shù)超過(guò)規(guī)定值?？赡転檠“寰奂隆?duì)血小板有異常警號(hào)。,（,3．白細(xì)胞粒度分布異常實(shí)例分析１．LD度數(shù)高： （1）當(dāng)LD度數(shù)高，存在T1和T2谷值的粒度分布時(shí)，WBC的所有參數(shù)將標(biāo)上警號(hào)WL。常見(jiàn)于存在紅細(xì)胞溶血不全，出現(xiàn)有核紅細(xì)胞，大血小板增多，血小板聚集，纖維蛋白析

11、出等現(xiàn)象時(shí)。,（2）當(dāng)LD高，有T1，沒(méi)T2的粒度分布分布時(shí)，在WBC、LYM%、LYM#結(jié)果上標(biāo)有WL，余分類結(jié)果不出現(xiàn)結(jié)果，但也有WL警號(hào)。,T2警號(hào)表示不能設(shè)定中間細(xì)胞與中性粒細(xì)胞之間的波谷鑒別線，常見(jiàn)于出現(xiàn)幼稚粒細(xì)胞、紅細(xì)胞溶血不全，標(biāo)本放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等情況。,（3）當(dāng)LD高，沒(méi)有T1、T2的粒度分布時(shí)，僅出現(xiàn)WBC結(jié)果，并標(biāo)有警號(hào)WL，其他分類參數(shù)均不輸出結(jié)果。？？？,（4）黃疸病人的特征性改變：由于黃疸病人紅細(xì)胞膜上脂質(zhì)含量增

12、多，蛋白質(zhì)含量減少，對(duì)溶血素的拮抗作用增加，因而使紅細(xì)胞難于破碎。,2. 沒(méi)有T1：不輸出白細(xì)胞分類結(jié)果，T1警號(hào)表示不能設(shè)定淋巴細(xì)胞與中間細(xì)胞之間的波谷鑒別線，常見(jiàn)于出現(xiàn)幼稚粒細(xì)胞、紅細(xì)胞溶血不全等情況。,3. 沒(méi)有T2T1高，T2沒(méi)有的粒度分布：WBC結(jié)果無(wú)警號(hào)，LYM％、LYM#結(jié)果標(biāo)有警號(hào)F1，余參數(shù)不輸出結(jié)果，但標(biāo)有警號(hào)T2。警號(hào)F1表示T1鑒別線位置上相對(duì)度數(shù)超過(guò)預(yù)定值。常見(jiàn)于存在幼稚粒細(xì)胞，單核細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)

13、胞增高，紅細(xì)胞溶血不全，標(biāo)本放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等情況。,4. T1高（1）僅T1高的粒度分布時(shí)：WBC、GRAN％、GRAN#結(jié)果無(wú)警號(hào)，LYM%、LYM#結(jié)果標(biāo)有警號(hào)F1，MXD％、MXD％結(jié)果標(biāo)有警號(hào)F2。警號(hào)F2表示T1或T2鑒別線位置上相對(duì)度數(shù)超過(guò)預(yù)定值。常見(jiàn)于存在原始細(xì)胞、幼稚粒細(xì)胞，單核細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞增高，紅細(xì)胞溶血不全，標(biāo)本放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等情況。,（2）T1高，T2高，：WBC結(jié)果標(biāo)有警號(hào)WU， LYM%、LYM#

14、結(jié)果標(biāo)有警號(hào)F1，MXD％、MXD％結(jié)果標(biāo)有警號(hào)F2，GRAN％、GRAN#結(jié)果標(biāo)有警號(hào)F3。警號(hào)F3表示T2鑒別線位置上相對(duì)度數(shù)超過(guò)預(yù)定值。常見(jiàn)于存在幼稚粒細(xì)胞，單核細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞增高，紅細(xì)胞溶血不全，標(biāo)本放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等情況。,5. T2高（1）僅T2高的粒度分布時(shí)：WBC、 LYM%、LYM#結(jié)果沒(méi)有警號(hào)，MXD％、MXD％結(jié)果標(biāo)有警號(hào)F2，GRAN％、GRAN#結(jié)果標(biāo)有警號(hào)F3。？？？,6. UD高：WBC結(jié)果標(biāo)有

15、警號(hào)WU，余參數(shù)的結(jié) 果都沒(méi)有警號(hào)。？？？,（7）LD以下的粒子數(shù)增多：PLT結(jié)果標(biāo)有警號(hào)AG。,圖例,四．小結(jié),1. 結(jié)果不輸出： T1負(fù)責(zé)監(jiān)視淋巴細(xì)胞區(qū)域和中間細(xì)胞區(qū)域，T2負(fù)責(zé)中間細(xì)胞區(qū)域和中性粒細(xì)胞區(qū)域，當(dāng)白細(xì)胞粒度分布的曲線異常，儀器在該分布曲線上找不到谷低T1或T2，或T1、T2同時(shí)找不到時(shí)，T1和T2辨別線負(fù)責(zé)監(jiān)視的細(xì)胞群結(jié)果就不輸出。2. 引起白細(xì)胞直方圖異常原因分析（1）病理因素：白細(xì)胞直方圖的變化，可反映血液中

16、白細(xì)胞群體的改變，但這種變化沒(méi)有特異性，引起血液學(xué)變化的病因不同，但其白細(xì)胞直方圖的變化相近，因此出現(xiàn)的提示警號(hào)就是給檢驗(yàn)師的命令，要求我們進(jìn)行顯微鏡復(fù)查血涂片。,（2）非病理因素：（a）儀器因素：凡影響細(xì)胞脈沖信號(hào)的因素，都可以使白細(xì)胞直方圖發(fā)生變化，除血細(xì)胞自身體積大小外，其他如儀器的閾值、孔電壓和脈沖的增益都與脈沖大小有關(guān)。（b）試劑因素：試劑的性能好壞可直接影響細(xì)胞直方圖的變化，如稀釋液的電導(dǎo)率、滲透壓、離子強(qiáng)度；溶血?jiǎng)┑姆N

17、類、濃度、用量和溶血時(shí)間，都會(huì)產(chǎn)生干擾，使細(xì)胞直方圖發(fā)生改變，因此應(yīng)強(qiáng)調(diào)使用原裝配套的稀釋液和溶血?jiǎng)?。另外抗凝劑的種類和濃度也會(huì)影響細(xì)胞直方圖，通常應(yīng)選用EDTA-K２，1.5-2.0mg抗凝劑抗凝1.0ml全血。（c）樣本放置時(shí)間：一般認(rèn)為樣本應(yīng)在采集后20分鐘至二個(gè)小時(shí)內(nèi)檢測(cè)。若放置時(shí)間過(guò)短，可能存在血小板沒(méi)有完全解離、抗凝劑未完全溶解等情況。若放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則易引起細(xì)胞的變形，尤其是一些免疫功能亢進(jìn)的病人，其淋巴細(xì)胞容易變成異型

18、淋巴細(xì)胞，從而使白細(xì)胞直方圖變形。,三、紅細(xì)胞直方圖解析（一）基本概念儀器在36－360fL范圍內(nèi)分析紅細(xì)胞。橫座標(biāo)表示紅細(xì)胞體積，縱座標(biāo)表示不同體積的紅細(xì)胞出現(xiàn)的頻率。正常紅細(xì)胞主要出現(xiàn)在50－200fL之間，在直方圖上可見(jiàn)兩個(gè)細(xì)胞群體，從50－150fL區(qū)域有一個(gè)幾乎兩側(cè)對(duì)稱，較狹窄的正態(tài)分布曲線，在主峰右側(cè)約分布在125－200fL區(qū)域的細(xì)胞為大紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞。,（二）分類規(guī)則：在紅細(xì)胞直方圖上，依據(jù)細(xì)胞的大小，按以下的規(guī)

19、則分類：（1）位于紅細(xì)胞低鑒別位線（RL）和紅細(xì)胞高鑒別位線(RU)之間的細(xì)胞為紅細(xì)胞。（2）紅細(xì)胞低鑒別位線（RL）為血小板與紅細(xì)胞的分界線。如果存在小紅細(xì)胞、大紅細(xì)胞、血小板簇，可以根據(jù)紅細(xì)胞直方圖的改變檢測(cè)出來(lái)。（3）超過(guò)高鑒別位線（RU）為存在紅細(xì)胞聚集。,（三）常見(jiàn)異常直方圖及報(bào)警信號(hào)含意1. RL：低鑒別線與紅細(xì)胞直方圖交點(diǎn)高，提示存在電子噪聲干擾，破碎紅細(xì)胞，大血小板增多，血小板聚集等情況。,2. RU：高鑒別線與

20、紅細(xì)胞直方圖交點(diǎn)高，提示存在電子噪 聲，冷聚集素的干擾或有白細(xì)胞極度增高。 DW：相對(duì)度數(shù)20%處的高度線與紅細(xì)胞直方圖曲線交點(diǎn) 增高，提示紅細(xì)胞明顯大小不均。,圖 例,圖例,四、血小板直方圖解析,（一）基本概念儀器在2－30fL范圍內(nèi)分析血小板。正常血小板直方圖呈左偏態(tài)分布，血小板主要集中在2－15fL內(nèi)。儀器使用3條鑒別線來(lái)進(jìn)行血小板的粒度解析，分別為2-6fl和12-30fl之間自動(dòng)決定的2條浮動(dòng)鑒別線（LD）和（U

21、D），以及固定鑒別線12fl。通過(guò)對(duì)三條鑒別線對(duì)血小板直方圖進(jìn)行監(jiān)控，檢查是否存在LD、UD相對(duì)度數(shù)的異常，分布寬度的異常及雙峰或多峰。（二）血小板粒度異常標(biāo)記當(dāng)血小板粒度分布不正常時(shí)，粒度分布異常標(biāo)記將標(biāo)在相應(yīng)結(jié)果上。當(dāng)有兩個(gè)以上的標(biāo)記時(shí)，將標(biāo)上優(yōu)先順序最高的標(biāo)記。,1. PL：低鑒別線（LD）處相對(duì)度數(shù)超過(guò)設(shè)定值。提示存在電子噪聲、冷凝蛋白、破碎紅細(xì)胞、白血病性白細(xì)胞碎片等的干擾。,2. PU：高鑒別線（UD）處相對(duì)度數(shù)超過(guò)設(shè)定