抗菌藥物合理使用材料革蘭陰性桿菌

1、革蘭陰性桿菌,泉州第一醫(yī)院 微生物室,概 述,臨床常見的革蘭陰性桿菌主要分為兩大群腸桿菌科非發(fā)酵菌群,2007度衛(wèi)生部細菌耐藥監(jiān)測 共分離菌株108137株，包括革蘭陽性菌33278株，占30.8%，革蘭陰性菌74859株，占69.2 %,,2008度泉州第一醫(yī)院細菌耐藥監(jiān)測,共分離菌株1012株，革蘭陰性菌703株，占69.5%, 革蘭陽性菌309株，占30.5%，,銅綠幾乎對全部抗菌藥物敏感率低于80％界線

2、值；產(chǎn)ESBL的肺克和大腸高達30～50％；70％大腸桿菌對氟喹諾酮耐藥；ICU經(jīng)常出現(xiàn)全耐藥鮑曼不動桿菌和銅綠；,腸桿菌科（Enterobactericaeae）,包括致病性較強、能引起人類傳染病的菌屬--鼠疫耶爾森菌、傷寒沙門菌能引起人類腹瀉和腸道感染的菌屬埃希菌屬志賀菌屬沙門菌屬耶爾森菌屬,一、概述,與醫(yī)院感染有關(guān)的條件致病菌,埃希菌屬克雷伯菌屬枸櫞酸桿菌屬腸桿菌屬泛菌屬,沙雷菌屬 變形桿菌屬 普羅威

3、登菌屬 摩根菌屬,腸桿菌科的共同特性,1. 形態(tài)染色相似：革蘭陰性桿菌 2. 培養(yǎng)特性相同：普通培養(yǎng)基上生長良好 3. 生化反應活潑：發(fā)酵葡萄糖，氧化酶陰性，觸酶陽性，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，O/F試驗為發(fā)酵型。4. 抗原構(gòu)造復雜5. 抵抗力弱 6. 易變異,,首先根據(jù)苯丙氨酸脫氨酶和VP試驗，將腸桿菌科14個菌屬分為三個組： 1）苯丙氨酸脫氨酶陰性和VP試驗陰性：埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬、枸櫞酸菌屬和愛德華菌屬

4、。2）苯丙氨酸脫氨酶陰性和VP試驗陽性：克雷伯菌屬、腸桿菌屬、哈夫尼亞菌屬、泛菌屬、沙雷菌屬、耶爾森菌屬。3）苯丙氨酸脫氨酶陽性和VP試驗陰性：變形桿菌屬、摩根菌屬、普羅威登斯菌屬。,2. 腸桿菌科分組,大腸埃希菌,,返回,大腸埃希菌KIA（AA＋－）MIU（＋＋－）,大腸埃希菌IMViC試驗（＋＋－－）右側(cè)為對照（－－＋＋）,臨床意義,腸道外感染 泌尿道感染（最常見） 膽道感染、腹

5、膜炎、肺炎 、菌血癥、新生兒腦膜炎腸道感染 ETEC、EPEC、EIEC、 EHEC、EaggEC,克雷伯菌屬,返回,肺炎克雷伯菌革蘭染色,肺炎克雷伯菌KIA（A A＋＋ ）、MIU（－－＋）,肺炎克雷伯菌IMViC試驗（－－＋＋）,該菌在正常人口咽部的帶菌率為1%～6%，在住院病人中可高達20%，是酒精中毒者、糖尿病和慢性阻塞性肺部疾病患者并發(fā)肺部感染的潛在的危險因素。,,,肺炎克雷伯

6、菌肺炎亞種還能引起各種肺外感染，包括腸炎和腦膜炎（嬰兒），泌尿道感染（兒童和成人）及菌血癥。近年在一些亞洲地區(qū)（特別是臺灣和韓國）由肺炎克雷伯菌引起的肝膿腫等嚴重社區(qū)獲得性侵襲性感染有上升的趨勢。,,臨床意義所致疾?。悍窝?、腦膜炎、腹膜炎、泌尿系統(tǒng)感染、敗血癥,大腸埃希菌和克雷伯菌屬的主要耐藥機制,產(chǎn)生超廣譜β內(nèi)酰胺酶（ESBL）。一旦產(chǎn)生ESBL，即對所有的青霉素類、頭孢菌素類和氨曲南耐藥，但對碳青霉稀類、β內(nèi)酰胺/酶抑制劑

7、復合類抗菌藥物和頭霉烯類敏感。,ESBL確認試驗,ESBL的質(zhì)控頻率,篩選試驗和表型確證試驗均可每日進行或每周進行，所選擇菌株為肺克700603或大腸埃希菌25922。 應該注意的是：肺克700603ESBL基因在質(zhì)粒上，應將其凍存于-60℃或以下。,奇異變形桿菌 ESBL 監(jiān)測試驗,*P. mirabilis 不同于其他菌 (比如 ≤17 mm and >4 µg/ml for E. coli and K

8、lebsiella spp.); NA, 不適用,CLSI M100-S16; Table 2A (M2, M7),43,NEW,ESBL的耐藥特點,水解青霉素，頭孢菌及單酰胺類（氨曲南）藥物，產(chǎn)生ESBL的細菌對上述抗菌藥物耐藥。對氨基糖苷類、喹諾酮類、磺胺類等多種抗菌藥物往往也同時具有耐藥性,以下情況提示產(chǎn)ESBLs菌感染,腸桿菌科細菌，尤其大腸、克雷伯菌 對一個 或多個三代頭孢敏感性下降 常伴有氨基糖苷、喹諾酮多重耐

9、藥 三代頭孢用藥史 對頭孢呋新耐藥 對碳青霉烯敏感 頭霉素、部分酶抑制劑有效 三、四代頭孢臨床治療效果不好,ESBL敏感報告,臨床分離到大腸埃希菌或克雷伯菌屬細菌，均應檢測是否產(chǎn)ESBL，如確認為產(chǎn)ESBL菌株，不管體外藥敏試驗的結(jié)果如何，對所有頭孢菌素和氨曲南均應報告耐藥。對頭霉素和碳青霉烯類按實際報告。,ESBL菌株的治療原則,1、當懷疑產(chǎn)ESBL時，不管體外敏感與否，應 避免使用頭孢菌素。2、第四代頭孢菌素

10、仍未能解決ESBL的 問題， 原則上，用它們治療產(chǎn)ESBL菌株是不安全的。3、可以用頭霉菌素、碳青霉烯類、?-內(nèi) 酰胺酶 抑制劑復方制劑。,是腸桿菌科中最常見的環(huán)境菌群，醫(yī)院感染的重要病原菌。在臨床微生物室檢出率最高的是陰溝腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌，可引起泌尿道感染、呼吸道感染、傷口感染以及敗血癥。,腸桿菌屬,產(chǎn)AmpC酶菌株的治療原則,產(chǎn)AmpC酶細菌的治療，首選4代頭孢（頭孢吡肟）和碳青霉烯類抗菌藥物。

11、 近年發(fā)現(xiàn)已有質(zhì)粒介導的AmpC酶出現(xiàn)，主要影響大腸和肺炎克雷伯菌。,非發(fā)酵革蘭陰性桿菌,概述,非發(fā)酵菌革蘭陰性桿菌概念：一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無芽胞的革蘭陰性桿菌。,分類、命名,主要的菌屬：假單胞菌屬（Pseudomonas)產(chǎn)堿桿菌屬（Alcaligenes)無色桿菌屬（Achromobacter)不動桿菌屬（Acinetobacter)莫拉菌屬（Moraxella)金氏桿菌

12、屬（Kingella)黃桿菌屬（Flavobacterium）窄食單胞菌屬（Xanthomonas)叢毛單胞菌屬（Comamonas),非發(fā)酵菌的基本鑒定要求,1、缺少糖發(fā)酵的證據(jù)，通常是在KIA培養(yǎng)基中無酸產(chǎn)生，斜面和底部均呈紅色。2、氧化酶陽性（不動桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌、唐菖蒲伯克菌、淺黃華麗單胞菌、棲稻黃素單胞菌陰性）。3、麥康凱上生長很差或不生長,氧化酶試驗陽性：紫紅色 陰性：無色,重要的鑒定試驗,1

13、、葡萄糖利用（OF試驗）2、動力半固體培養(yǎng)基 更準確的方法是濕片法和鞭毛染色。3、色素形成非發(fā)酵菌可形成多種色素，有助于菌種的鑒定。,,,銅綠假單胞菌,分布廣泛，也是醫(yī)院內(nèi)感染最多見的細菌，感染多發(fā)生于燒傷、急性白血病、器官移植病人及靜脈藥癮者，感染多位于潮濕部位，如氣管造口、留置的導管、創(chuàng)面、外耳道、角膜和滲出性皮膚傷口處,,囊性纖維化病人呼吸道分離的銅綠假單胞菌具有生物膜（其產(chǎn)生的大量藻酸鹽包圍了菌體所致），導致本病的治

14、療困難和高死亡率。其淡藍綠色膿性滲出物及聞到綠膿素的生姜樣氣味具有特征性。,生物學特性,細長革蘭陰性桿菌， 極單鞭毛，嚴格需氧，氧化利用葡萄糖、 MAC生長在普通瓊脂平板上產(chǎn)生特征性的藍綠色水溶性綠膿素和黃綠色青膿素（熒光假單胞菌和惡臭假單胞菌也可產(chǎn)生）血平板上形成大而扁平，濕潤，邊緣不齊，有金屬光澤，有生姜氣味的灰綠色菌落，并形成透明溶血環(huán)最適生長溫度35℃，4℃不生長，42℃可生長,,,銅綠假單胞菌的耐藥性,耐藥機制外膜通

15、透性降低產(chǎn)生滅活酶或鈍化酶主動外排系統(tǒng)將抗菌藥物泵出胞外,,,本菌對氨芐西林、安美汀、四環(huán)素、優(yōu)力新、一、二代頭孢菌素、頭霉素、大環(huán)內(nèi)酯類、磺胺等天然耐藥各種抗菌藥物治療銅綠假單胞菌所致感染過程中都可能發(fā)生耐藥。,檢驗結(jié)果分析與報告,診斷一定要與臨床表現(xiàn)相結(jié)合2 治療過程中，3－4天后重復藥敏測試,如果是PDR-PA,避開細菌的耐藥機制的藥物選擇：氨曲南能逃離金屬酶米喏環(huán)素、替加環(huán)素能逃離泵出機制亞胺培南R，美羅培

16、南能逃離oprD缺失，可能有活性美羅培南R， 亞胺培南能逃離泵出機制，可能有活性老藥新用：粘菌素、多粘菌素對PDR-PA有效,鮑曼不動桿菌,廣泛分布于自然和醫(yī)院環(huán)境中，通常不動桿菌對健康人體不致病，但對體弱者可引起感染。本菌能引起的醫(yī)院獲得性感染有增加的趨勢，醫(yī)院獲得性感染最常見的是呼吸道或手術(shù)部位、應用器械或ICU的住院患者。,鮑曼不動桿菌,下列特征可對其做預先鑒定： 1）麥康凱平板上生長良好（菌落可呈輕微粉紅色）2）氧

17、化酶陰性3）氧化分解葡萄糖，產(chǎn)酸4）氧化分解乳糖，產(chǎn)酸5）無動力6）對青霉素耐藥,,,臨 床 意 義,不動桿菌所致疾病包括肺炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、皮膚和傷口感染、腹膜炎和尿道感染等。不動桿菌對青霉素、氨芐青霉素耐藥，大多數(shù)菌株對氯霉素耐藥，對氨基糖苷類抗菌藥物耐藥的菌株也逐漸增多，不同菌株對二代和三代頭孢菌素耐藥性不同，所以每個分離菌株都應進行藥敏試驗。多重耐藥菌株最常多見于鮑曼不動桿菌和溶血不動桿菌。,藥物敏感試驗及結(jié)果解

18、釋,Kirby-Bauer法做藥敏試驗，藥物的選擇與假單胞菌抗生素的分組相同鮑曼氏不動桿菌，對全部氨基青霉素、一代二代頭孢菌素和一代喹諾酮類抗生素天然耐藥,,經(jīng)驗用藥 粘菌素或多粘菌素B 舒巴坦 替加環(huán)素、米諾環(huán)素、多西環(huán)素,碳青霉烯類耐藥的鮑曼不動桿菌,嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌,屬于假單胞菌科的rRNA同源群Ⅴ嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌（S.maltophilia）,分類,,臨 床 意 義,為條件致病菌呼吸道、泌尿道、傷口等部位感染，

19、菌血癥及心內(nèi)膜炎。在不發(fā)酵菌引起的感染中，僅次于銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌，居臨床分離陽性率的第三位。,藥物敏感試驗及結(jié)果解釋,治療首選磺胺類：TMP/SMZ；喹锘酮類.泰能(Imipenem)天然耐藥藥敏試驗紙片法僅有三種抗生素：左氧氟沙星、米諾環(huán)素、復方磺胺有折點。其他藥敏試驗應選用肉湯、瓊脂稀釋法作MIC，或采用E-TEST的方法。,,黃桿菌屬臨 床 意 義,是條件致病菌醫(yī)院感染的常見菌之一引起敗血癥、新生兒及嬰幼兒的化

20、膿性腦膜炎,藥物敏感試驗及結(jié)果解釋,臨床經(jīng)驗用藥可選磺胺及大環(huán)內(nèi)脂類的紅 霉素。 臨床上常見的腦膜炎敗血黃桿菌及芳香黃 桿菌等對廣譜抗菌藥有耐藥性，所以最好,根據(jù)藥敏試驗選擇用藥。,,細菌實驗室應對不同的細菌檢驗報告時間和內(nèi)容應有相應的規(guī)定，并告訴臨床各科，依此可防止不明原因的報告延遲應分兩種報告形式：1.危重感染報告:2.常規(guī)報告:,臨床細菌室報告制度的規(guī)范,1.涂片報告,1.革蘭染色：危重報告30－６０分鐘報告

21、。報告內(nèi)容應包括染色反應、是細菌或真菌、細菌形態(tài)。有無細胞內(nèi)吞嗜現(xiàn)象，有無菌絲。2.抗酸染色：報告抗酸染色陽性或陰性；菌量以加號表示。常規(guī)報告24h,危重報告1h－2ｈ。,2.血液和無菌體液培養(yǎng)的報告制度,實行三級報告制度：第一級：培養(yǎng)液直接涂片結(jié)果；第二級：初步藥敏結(jié)果和平皿菌落涂片結(jié)果；第三級：正式細菌鑒定和藥敏報告。,3.便培養(yǎng),24小時可發(fā)出初始報告;72小時應報告藥敏試驗結(jié)果；根據(jù)檢測范圍報告檢測結(jié)果，如未檢測出沙

22、門菌、志賀菌。 錯誤報告: 未見到致病菌,4.尿培養(yǎng),可在24小時報告初始結(jié)果，包括菌落計數(shù)和可能細菌種類，如氧化酶陰性的革蘭陰性桿菌；金黃色葡萄球菌等。,5.痰培養(yǎng),24小時初始報告，報告內(nèi)容包括痰標本是否合格，優(yōu)勢細菌，金葡菌、銅綠假單孢菌等特征明顯細菌的鑒定結(jié)果。,6.分泌物報告,24h初始報告：有無細菌生長；革蘭陽性或陰性細菌或特征明顯的細菌名稱；根據(jù)涂片結(jié)果推測致病菌。,微生物室與臨床的溝通,由于微生物結(jié)果的滯后性加上臨床

23、標本分離微生物是否是致病菌在判斷上存在一點的困難，因此臨床醫(yī)生不是很重視微生物的檢查結(jié)果，這就需要臨床微生物工作人員及時和臨床醫(yī)生溝通，讓他們認識到臨床微生物實驗室的重要性。,,1。互相尊重，互相理解雙方工作的重要性。臨床一些疑似病例的確診，應用抗菌藥物的指導，都離不開臨床微生物實驗室的結(jié)論和報告，臨床微生物實驗室的病原微生物的檢測報告，一些實驗的結(jié)論必須與臨床數(shù)據(jù)結(jié)合分析，才具備科學性與完整性，另外臨床微生物實驗的樣品來自臨床科室，沒