西維因降解菌的分離鑒定、生物學(xué)特性及其水解酶基因cehA的克隆.pdf

1、西維因是一種中等毒性的氨基甲酸酯類殺蟲劑，廣泛用于果樹、蔬菜、糧食、藥材、茶等141種作物中，可防止565種害蟲。其殺蟲作用機(jī)制為抑制害蟲神經(jīng)傳導(dǎo)的重要物質(zhì)——乙酰膽堿酯酶(AChE)。西維因大面積、持續(xù)地使用，其在環(huán)境中的殘留已對人類健康和生態(tài)環(huán)境的平衡產(chǎn)生潛在的威脅。以微生物降解為基礎(chǔ)的生物修復(fù)是一種環(huán)境友好型污染物去除方法。
　　 本研究從某生產(chǎn)西維因農(nóng)藥的工廠的廢水處理系統(tǒng)污泥中分離篩選到兩株西維因降解菌FX-1和X9。

2、根據(jù)其形態(tài)、生理生化特性及16S rRNA基因序列相似性比較，將FX-1和X9初步鑒定為Sphingobium sp.和Rhizobium sp.。
　　 菌株FX-1和X9的最適生長溫度均為30℃;最適生長pH均為7.0;最適生長NaCl濃度分別為5 g·L-1和10 g·L-1;FX-1和X9的最適生長碳源均為葡萄糖;最佳無機(jī)氮源分別為硫酸銨和硝酸銨;它們均對鏈霉素有抗性。
　　 菌株FX-1和X9能夠以西維因為唯一

3、碳源生長，分別在6h和4h內(nèi)完全降解34mg·L-1的西維因，F(xiàn)X-1和X9降解西維因的最適溫度分別為30℃和37℃;最適pH分別為8.0、9.0;通氣量對菌株FX-1降解西維因影響較大，而對菌株X9降解西維因的影響不明顯;
　　 菌株X9能夠以西維因的水解產(chǎn)物1-萘酚為唯一碳源生長，可以在16h內(nèi)完全降解34 mg·L-1的1-萘酚，并且接種量越大，其降解1-萘酚的延滯期越短;X9降解1-萘酚的最適溫度為30℃;最適pH為7.

4、0;通氣量越大，降解速率越快;能較好的降解20-200 mg·L-1的1-萘酚。
　　 根據(jù)已報道的西維因降解相關(guān)基因設(shè)計引物，從X9中擴(kuò)增出cehA基因。通過在線比對序列相似性，在核苷酸水平上它們與西維因降解菌AC100的cehA基因相似性為99％。將cehA基因構(gòu)建到表達(dá)載體pET32a中，在Ecoli Rosetta-gami(DE3)中進(jìn)行了表達(dá)，得到了分子量符合預(yù)期大小的蛋白質(zhì)(85 KDa)，該蛋白具有西維因水解酶活