乙型腦炎病毒四川株的分離鑒定及其生物學特性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、乙型腦炎(Japanese encephalitis, JE)是由黃病毒科的乙型腦炎病毒(JEV)引起的以蚊蟲為媒介傳播的人畜共患病毒性疾病,豬是JEV的擴增宿主,帶毒豬是本病的主要傳染源,因此,防制豬患乙腦不但可以減少養(yǎng)豬業(yè)的損失,而且也是防制乙腦的重要措施。本研究旨在從四川地區(qū)分離豬乙型腦炎病毒,并且對分離株進行系統的生物學特性研究,為乙型腦炎的流行病學調查和分類學研究提供素材,并為有效地防控型乙腦提供理論依據。研究內容如下:

2、>   1.乙型腦炎病毒四川株的分離與鑒定
   乙型腦炎病毒的分離:從四川多個地區(qū)豬場采集流產死胎及蚊蟲樣本30余份,將病料處理后接種BHK21細胞及3-5日齡乳鼠,細胞盲傳至第4代時,接種采自崇州和內江豬場蚊蟲樣本的細胞出現細胞堆積、變圓變亮、死亡等疑似JEV病變,96hCPE即達到95%,隨著傳代代數的增加,細胞病變更加穩(wěn)定;采用乳鼠對崇州及內江病料進行腦內接種,崇州株接種第三代后3天開始發(fā)病,內江株則是第五代開始發(fā)病。

3、癥狀均為離群、拒乳、抽搐、發(fā)熱、消瘦,至96~120h出現毛聳、顫抖、強直、肢體痙攣、神經系統興奮性增強。隨著時間的推移,癥狀逐漸加劇,最終轉為麻痹而死亡,其死亡率均為100%,剖檢可見腦部充血、水腫。
   兩株JEV疑似株的鑒定:以終點稀釋法將病毒液進行初步純化;對所分離病毒進行電鏡超微結構觀察、中和實驗、瓊擴實驗、間接免疫熒光實驗、間接ELISA實驗、以及保守區(qū)序列測定。結果為:細胞超薄切片電子顯微鏡下觀察可見60nm左右

4、病毒顆粒;所分離病毒能被JEV陽性血清所中和;瓊擴實驗、間接免疫熒光實驗、間接ELISA實驗均呈陽性反應;經PCR均可擴增出其Prm-E基因的高保守區(qū)(439bP)。以上試驗證實本試驗所分離到的病毒為JEV,崇州株命名為CZ-1株,內江株命名為NJ-1株。
   2.四川分離株的生物學特性分析
   病毒的核酸類型實驗證明CZ-1株和NJ-1株均為RNA病毒;有血凝性;理化實驗實驗證實該兩株病毒均對乙醚、氯仿和去膽酸鹽敏

5、感,為囊膜病毒,在PH3-5條件下病毒顆粒易失活,經胰蛋白酶處理后其感染力明顯下降,60℃加熱60min、100℃加熱3min均可使其滅活。
   CZ-1株和NJ-1株病毒TCID50值分別為10-6.206/0.025ml和10-5.215/0.025mL;對3-5日齡乳鼠的致死性均為100%,對9-11g小鼠,無論腦內、皮下、腹腔毒力都差距不大,但對14~16g較大日齡小鼠的皮下毒力則差別明顯。取小鼠腦、心、肝、肺、脾、腎

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