抗頭孢噻呋多克隆抗體和抗氯霉素多克隆抗體制備的研究.pdf

1、頭孢噻呋作為第一個(gè)動(dòng)物專用的頭孢菌素類抗生素，由于其在獸醫(yī)臨床上的日益廣泛使用，其在動(dòng)物性食品中的殘留也逐漸引起人們的高度關(guān)注，快速檢測頭孢噻呋在動(dòng)物性食品中的殘留成為畜牧生產(chǎn)實(shí)踐中亟待解決的問題。氯霉素是第一個(gè)人工合成的廣譜抗生素，因其效高價(jià)廉，在我國畜牧業(yè)中得到廣泛應(yīng)用，成為畜禽疾病防治的重要藥物。隨著氯霉素的廣泛應(yīng)用及研究的深入，發(fā)現(xiàn)其有許多嚴(yán)重的副作用，因此，必須控制氯霉素在動(dòng)物性食品中的殘留，建立一種快速檢測氯霉素殘留的方法。

2、 本研究采用免疫學(xué)技術(shù)，成功制備抗頭孢噻呋多克隆抗體和抗氯霉素多克隆抗體，并初步建立了檢測頭孢噻呋和氯霉素在動(dòng)物性食品中殘留的ELISA方法，為其單克隆抗體的制備和試劑盒的開發(fā)打下了良好的基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容如下： 1.成功制備了抗-CEF多克隆抗體 1.1采用直接法將頭孢噻呋(CEF)與牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分別合成免疫抗原(CEF-BSA)和檢測抗原(CEF-OVA)，用紫外(UV)、SDS聚

3、丙烯酰胺凝膠電泳法進(jìn)行鑒定，并用正交分解法優(yōu)化了抗原合成過程。 1.2用CEF-BSA免疫Balb/c小鼠得到抗CEF多克隆抗體，間接ELISA檢測抗血清的效價(jià)為1:135000，間接競爭EIASA測定CEF的標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性范圍為100ng/mL-1000ng/mL，線性方程是y=-2.6x+206.0，相關(guān)系數(shù)(r)為0.98，IC50是206.0ng/mL，檢測限為49.1ng/mL，以200ng/mL-800ng/mL，濃

4、度添加時(shí)，牛奶中的回收率為79.2％-94.5％，變異系數(shù)為5.1％-13.4％。 2.成功制備了抗-CAP多克隆抗體 2.1將氯霉素(CAP)和琥珀酸酐合成半抗原琥珀酰氯霉素(CAP-HS)，然后在碳化二亞胺(EDC)作用下與牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分別合成免疫抗原(CAP-BSA)和檢測抗原(CAP-OVA)，用紫外(UV)、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法進(jìn)行鑒定，并用正交分解法優(yōu)化了抗原合成過程。

5、 2.2用CAP-BSA免疫家兔和Balb/c小鼠都得到抗CAP多克隆抗體，間接ELISA檢測抗血清的效價(jià)為1:162000，間接競爭ELISA測定CAP的標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性范圍為10ng/mL-100ng/mL，線性方程是y=4.3x+32.4，相關(guān)系數(shù)(r)為0.98，IC50是32.4ng/mL，檢測限為0.94ng/mL，以20ng/mL-100ng/mL濃度添加時(shí)，雞蛋中的回收率為79.4％-98.5％，變異系數(shù)為0.5％-4.