和緩艾美耳球蟲與早熟艾美耳球蟲江蘇株的分離鑒定及其生物學(xué)特性研究.pdf

1、雞球蟲病是一種由艾美耳屬球蟲引起的呈世界性分布的寄生蟲病，給養(yǎng)雞業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。常見的雞球蟲有七種，包括柔嫩艾美耳球蟲(E.tenella)、毒害艾美耳球蟲(E.necatrix)、堆型艾美耳球蟲(E.acervulina)、巨型艾美耳球蟲(E.maxima)、布氏艾美耳球蟲(E.brunetti)、和緩艾美耳球蟲(E.mitis)和早熟艾美耳球蟲(E.praecox)，這七種球蟲在臨床上多呈混合感染。
　　 本研究對江蘇

2、地區(qū)18個雞場雞球蟲感染情況進行了流行病學(xué)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)江蘇省內(nèi)18個雞場內(nèi)12個雞場存在球蟲感染，感染率為66.7％.經(jīng)過ITS1-PCR檢測，發(fā)現(xiàn)陽性樣品多呈幾種艾美耳球蟲的混合感染。其中，柔嫩艾美耳球蟲感染率最高，達91.7％，是江蘇地區(qū)的優(yōu)勢蟲株;堆型艾美耳球蟲的感染率為33.3％;布氏艾美耳球蟲為8.3％;巨型艾美耳球蟲為58.3％;和緩艾美耳球蟲為50.0％;毒害艾美耳球蟲為50.0％;早熟艾美耳球蟲為33.3％.
　　

3、 通過對瓊脂分離單球蟲卵囊方法進行改進，建立了球蟲單卵囊分離技術(shù)，應(yīng)用該技術(shù)成功地分離出兩株球蟲卵囊，即和緩艾美耳球蟲江蘇株(E.mitis-JS)和早熟艾美耳球蟲江蘇株(E.praecox-JS)，并對分離到的蟲株分別進行了形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定.結(jié)果表明E.mitis-JS株卵囊的大小為13.8～18.2μm×12.0～16.7μm，平均大小為15.3μm×13.6μmμm.卵囊指數(shù)為1.13;E.praecox-JS株卵囊的大小為

4、18.3～22.1μm×15.1～18.9μm，平均大小為19.5μm×16.1μm，卵囊指數(shù)為1.21.提取卵囊基因組，設(shè)計特異性引物對兩株卵囊進行PCR鑒定，分別成功擴增出306bp和368bp特異性片斷，進一步證明所分離球蟲為和緩艾美耳球蟲和早熟艾美耳球蟲.
　　 以不同的劑量（1000、5000、10000、100000和200000個卵囊/羽）的E.mitis-JS和E.praecox-JS的經(jīng)口感染7日齡羅曼公雞，研

5、究其致病性。結(jié)果表明，隨著感染劑量的增加，雞只增重減少，腸道病變逐漸加重.當(dāng)感染劑量大于10000時，感染組與對照組的平均增重差異均為顯著(P＜0.05）。兩個蟲種均能引起腸絨毛斷裂，上皮細胞變性、壞死等病理變化，感染劑量到達100000時，可見肝臟和脾臟明顯出血.用ELISA方法測定感染雞血清IgG和腸道IgA水平，發(fā)現(xiàn)感染組較對照組IgG和IgA均有增加，兩種球蟲均在感染劑量為5000時，引起的IgG、IgA變化最顯著。
　　

6、 隨后，又對E.mitis-JS和E.praecox-JS的免疫原性進行了研究。將兩種球蟲分別以不同的劑量(100、500、1000、5000個卵囊/羽)經(jīng)口接種7日齡羅曼公雞，14d后用100000個卵囊/羽的劑量感染所有的免疫雞只，通過平均增重、OPG等指標(biāo)研究其免疫原性。實驗結(jié)果表明，E.mitis-js免疫劑量為5000時，雞只增重率由41.1％上升為84.9％，OPG由的3.23±0.58×105下降為0.84±0.46×1