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1、本文為了從可能的差異表達(dá)基因入手研究甘藍(lán)型油菜幼葉黃化突變體Cr3529黃化性狀的成因,從本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的野生型3529——突變體Cr3529正向抑制性消減雜交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)文庫中選取了33個(gè)克隆進(jìn)行序列分析。然后,為了研究反向消減文庫中一個(gè)未知基因功能,利用RACE(rapidamplificationofcDNAends)技術(shù),在已知片段的基礎(chǔ)上,對(duì)該基因的5’端cD
2、NA進(jìn)行了擴(kuò)增,經(jīng)過兩輪PCR得到了該基因5’端約1000bp的序列,將之與原有已知片段拼接得到一個(gè)大小為1343bp的片段,序列分析發(fā)現(xiàn)該片段的1~1299位堿基為基因編碼區(qū);BLAST分析表明,該基因與來自擬南芥的一個(gè)編碼未知蛋白質(zhì)的基因(GenBank登錄號(hào)At4g01080)同源性達(dá)80.1%,但由于單個(gè)堿基的變化,與擬南芥相比,該基因提前終止而在3’端少編碼了9個(gè)氨基酸。利用Swiss-model模型對(duì)該基因編碼的蛋白進(jìn)行了結(jié)
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