茶樹(shù)CsCBF基因及其啟動(dòng)子的克隆與序列分析.pdf

1、茶樹(shù)主產(chǎn)于熱帶及亞熱帶，是一種喜溫葉用常綠植物。茶樹(shù)品種間抗寒性相差顯著，在分子水平探索其抗寒機(jī)理，從抗寒優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源中發(fā)掘高效抗寒基因并加以利用成為茶樹(shù)抗寒育種的關(guān)鍵方向。本研究在克隆的茶樹(shù)CsCBF1基因cDNA全長(zhǎng)的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)特異性引物，以茶樹(shù)基因組DNA為模板，通過(guò)PCR技術(shù)獲得CsCBF1基因的全長(zhǎng)序列，并運(yùn)用染色體步移的方法克隆得到CsCBF1基因的啟動(dòng)子區(qū)域?qū)ζ溥M(jìn)行深入的分析和預(yù)測(cè)，旨在進(jìn)一步揭示茶樹(shù)抗低溫的分子生物學(xué)機(jī)

2、制。其主要的研究成果如下:
　　1，根據(jù)CsCBF1 cDNA序列，設(shè)計(jì)引物分離出CsCBF1編碼區(qū)的DNA序列。發(fā)現(xiàn)該基因不舍有內(nèi)含子，與其他植物中同源基因一致，保留了這個(gè)不符合一般真核生物基因的特征。
　　2，通過(guò)GenomeWalker的方法，運(yùn)用巢氏PCR進(jìn)行兩輪擴(kuò)增反應(yīng)，得到了1009bp的上游序列。利用Softberry（http://www.softberry.com）網(wǎng)站的TSSP（植物啟動(dòng)子預(yù)測(cè)）數(shù)據(jù)庫(kù)分析

3、了所克隆得到的可能為茶樹(shù)CsCBF1基因啟動(dòng)子的序列。結(jié)果發(fā)現(xiàn)此序列存在一個(gè)可能的啟動(dòng)子區(qū)，位置在326bp處，一個(gè)對(duì)應(yīng)的TATA盒（位置在338bp處），三個(gè)啟動(dòng)子共同的順式作用元件和增強(qiáng)子CAAT-BOX（位置分別在621bp，632bp，891bp處），增強(qiáng)子的存在會(huì)使基因的轉(zhuǎn)錄頻率大幅度增加。
　　3，運(yùn)用PLACE（植物順式作用元件數(shù)據(jù)庫(kù)）對(duì)結(jié)果序列進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)在該序列的正反鏈中存在在諸多調(diào)控元件及位點(diǎn)當(dāng)中。其中有兩個(gè)“