小鼠胚胎冷凍保存的研究.pdf

1、本研究采用程序冷凍、直接冷凍、玻璃化冷凍和開放式拉管法(OPS)法對小鼠桑葚胚和早期囊胚進行了冷凍保存，探討了不同冷凍方法對胚胎存活率的影響，并從冷凍保護劑、植冰溫度等不同角度加以研究，以胚胎冷凍后的體外培養(yǎng)和移植來鑒定其冷凍效果。 結(jié)果表明：1.將6～8周齡的昆明種雌鼠15只隨機分為三組，分別用PMSG和HCG以不同的處理劑量(5IU，10IU，15IU)進行超排處理，每只平均獲得胚胎數(shù)分別為16.2、23.2和19.0枚，正

2、常胚數(shù)分別為12.6、18.8和13.4枚，正常胚的比率分別為：77.78％、81.03％和70.53％，均達到了超排效果。結(jié)果表明10IU的處理劑量的超排效果較好(p＞0.05)。2.將超排獲得的桑葚胚和早期囊胚隨機分為(1)20％乙二醇(EG)+20％DMSO處理30秒，再經(jīng)0.3M蔗糖處理1min；(2)20％甘油(Gly)+20％1，2—丙二醇(1，2-Pro)處理30秒，再經(jīng)0.3M蔗糖(Suc)處理1min；(3)經(jīng)0.3M

3、蔗糖處理(解凍液處理組)1min；(4)不經(jīng)任何冷凍液和解凍液處理(對照組)四組。分別24h培養(yǎng)表明：擴張囊胚率為91.23％、80.65％、89.58％和90.74％；48h后的孵化率為64.91％、51.61％、83.33％和85.19％。(1)和(2)組間差異不顯著，二者與(3)和(4)相比，差異均顯著(p＜0.01)。3.分別用F1、F2和F3三種冷凍保護劑， 行常規(guī)程序冷凍方法冷凍，解凍后培養(yǎng)結(jié)果表明：擴張囊胚率分別為

4、78.18％、73.58％和57.14％；孵化囊胚率為45.45％、41.51％和26.53％，F(xiàn)1和F2顯著高于F3(p＜0.05)。4.將獲得的桑葚胚和早期囊胚放入冷凍液F1中平衡5min，冷凍室內(nèi)停留2min后植冰，再行程序冷凍。證明：-5.5℃、-6.0℃、-6.5℃植冰時，胚胎解凍后體外囊胚孵化率分別為40.38％、45.45％、12.50％，-5.5℃和-6.0℃組的顯著高于-6.5℃組(p＜0.01)。5.分別用程序冷凍、

5、常規(guī)玻璃化冷凍、OPS、直接冷凍法對小鼠桑葚胚進行冷凍保存。解凍后存活率分別為78.18％、70.37％、81.36％和44.92％；48h后的孵化率分別為45.45％、44.44％、50.85％和27.54％。前三種方法組間差異不顯著，但直接冷凍法和其他各組相比差異極顯著(p＜0.01)。6.將上述四種方法冷凍保存的83、68、75和71枚胚胎解凍后分別移植給8、6、6和6只受體，平均每只10～13枚，結(jié)果表明：妊娠率為12.5％(1