微生物檢驗(yàn)學(xué)之病毒感染的實(shí)驗(yàn)診斷

1、<p><b>　　病毒感染的實(shí)驗(yàn)診斷</b></p><p><b>　　第一節(jié)　概述</b></p><p>　　一、病毒的基本性狀　　病毒是一類非細(xì)胞型微生物，個(gè)體極小，可通過細(xì)菌濾器，需用電子顯微鏡觀察。僅含一種核酸作為遺傳物質(zhì)，外被蛋白質(zhì)衣殼或還有包膜。病毒只能在活細(xì)胞內(nèi)寄生，以復(fù)制的方式進(jìn)行增殖。在臨床微生物感染中，近75

2、%的傳染病是由病毒引起的。</p><p>　?。ㄒ唬┬螒B(tài)結(jié)構(gòu)　　1.大小和形狀 病毒體極其微小，測(cè)其大小的單位用納米表示。根據(jù)其大小大致分為：大型病毒（200～300nm）、中型病毒（80～160nm）和小型病毒（18～30nm）。病毒的形態(tài)大致可分為：球形或近似球形、桿狀、子彈狀、磚形、蝌蚪狀等?！　?.基本結(jié)構(gòu) 是指病毒的核心和衣殼兩部分。病毒的核心充滿一種類型的核酸，即DNA或RNA，構(gòu)成病毒的基因組

3、。此外，核心還含有少數(shù)功能蛋白，主要是病毒早期復(fù)制所需的一些酶。病毒的衣殼是包圍在核酸外的一層蛋白質(zhì)，由一定數(shù)量的殼粒聚合而成。衣殼可保護(hù)核酸免受核酸酶及其他理化因素的破壞。　　3.輔助結(jié)構(gòu) 病毒的包膜是病毒成熟后以出芽方式釋放包圍在核衣殼外的宿主細(xì)胞成分。包膜嵌有病毒編碼的糖蛋白，具有病毒的特異性。無包膜的病毒衣殼上也有些突出物。</p><p>　?。ǘ┎《镜脑鲋?病毒必須依賴宿主細(xì)胞，以特殊的自我復(fù)制方

4、式進(jìn)行增殖。病毒的復(fù)制周期一般可分為吸附、穿入、脫殼、生物合成、組裝與成熟、釋放6個(gè)階段。　　若病毒進(jìn)入細(xì)胞后的環(huán)境不利于它的復(fù)制，不能組裝或釋放有感染性的病毒顆粒，稱為頓挫感染。由于病毒基因組不完整或基因位點(diǎn)改變而復(fù)制出不完整無感染性的病毒，稱為缺損病毒?！　‘?dāng)兩種不同的病毒或兩株性質(zhì)不同的同種病毒，同時(shí)或先后感染同一細(xì)胞或機(jī)體時(shí)，可發(fā)生一種病毒抑制另一種病毒增殖的現(xiàn)象，稱為病毒的干擾現(xiàn)象。干擾現(xiàn)象是機(jī)體非特異性免疫的一部分，是抗

5、病毒免疫的重要內(nèi)容。除干擾現(xiàn)象外，當(dāng)一個(gè)細(xì)胞受到兩種或兩種以上的病毒感染時(shí)，還可出現(xiàn)雙重感染、互補(bǔ)、加強(qiáng)、表型混合與病毒雜交等現(xiàn)象。</p><p>　?。ㄈ┎《镜倪z傳和變異 病毒在增殖過程中常發(fā)生基因組堿基序列的置換、缺失或插入，引起基因突變。病毒因基因突變而發(fā)生表型改變的毒株稱為突變株?！　?.基因突變 條件致死性突變株、宿主范圍突變株、耐藥突變株。　　2.基因重組與重配　　3.基因整合 某些病毒感染

6、宿主細(xì)胞的過程中，病毒的DNA片段可插入細(xì)胞染色體DNA中，這種病毒基因組與細(xì)胞基因組的重組過程稱為基因整合?！　。ㄋ模┦删w 除了以動(dòng)、植物細(xì)胞為宿主的病毒外，尚有以細(xì)菌、真菌等為宿主的病毒，這些侵襲細(xì)菌等并在其中增殖，能引起細(xì)菌等裂解的病毒稱噬菌體。噬菌體具有識(shí)別細(xì)菌表面特異受體的功能，這種特異性是極為嚴(yán)格的，可用于進(jìn)行細(xì)菌的鑒定與分型。噬菌體感染細(xì)菌后產(chǎn)生兩種后果：一是噬菌體增殖并裂解細(xì)菌，建立溶菌周期；二是噬菌體在細(xì)菌內(nèi)不增殖

7、，其核酸整合于細(xì)菌染色體內(nèi)，并可隨細(xì)菌分裂而將噬菌體的核酸傳至子代細(xì)菌中，建立溶原狀態(tài)?！　。ㄎ澹┓菍こ２《?非尋常病毒是比病毒更小更簡(jiǎn)單的致病因子，又稱為亞病毒因子，包括類病毒、衛(wèi)星病毒和朊粒等。朊粒個(gè)體微小，不含核酸，其主要成分是一種蛋白酶抗性蛋白，對(duì)各種理化作用的抵抗力強(qiáng)，具有傳染性，是引</p><p>　　二、病毒的分類與命名　　病毒分類的依據(jù)和原則是病毒的基本性質(zhì)，主要包括①病毒的大小與形態(tài)；②核

8、衣殼的對(duì)稱類型；③有無包膜及刺突；④病毒基因組的特征；⑤天然宿主范圍；⑥傳播方式、媒介種類以及致病性、組織嗜性和病理學(xué)特性?！　〔《痉诸惖囊话阆到y(tǒng)是科、屬、種3級(jí)或科、亞科、屬、種4級(jí)。1995年的分類報(bào)告首先將病毒分為DNA病毒、RNA病毒、DNA和RNA反轉(zhuǎn)錄病毒三大類。目前認(rèn)為有24個(gè)科的病毒能感染人類和動(dòng)物。　　按傳播途徑可分為呼吸道病毒、胃腸炎病毒、經(jīng)性傳播感染的病毒等。按感染部位與癥狀特征可分為肝炎病毒、出血性熱病毒、皰

9、疹病毒等。</p><p>　　第二節(jié)　病毒感染的實(shí)驗(yàn)診斷</p><p>　　病毒可侵犯人體各系統(tǒng)，所致疾病見于臨床各科，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣。病毒學(xué)研究發(fā)展較快，免疫學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，出現(xiàn)了不少快速、簡(jiǎn)便、敏感、高特異性的實(shí)驗(yàn)室診斷方法?！　〔《緦W(xué)實(shí)驗(yàn)室診斷有三個(gè)方面：①直接檢測(cè)和分離鑒定；②檢測(cè)病毒蛋白抗原成分和核酸；③檢測(cè)抗體?！　　　∫?、標(biāo)本采集、運(yùn)送及處理　?。?/p>

10、一）標(biāo)本采集　　1.采樣時(shí)機(jī)應(yīng)在患者急性期或發(fā)病初期采集標(biāo)本?！　?.標(biāo)本種類根據(jù)不同病毒感染采集不同標(biāo)本，如鼻咽分泌物、腦脊液、血液、糞便等?！　。ǘ?biāo)本的運(yùn)送及保存 大多數(shù)病毒抵抗力較弱，在室溫中易被滅活，所以標(biāo)本要快速傳遞，立即處理和接種。采集和運(yùn)送過程注意冷藏。如不能立即處理和接種，可在4℃保存數(shù)小時(shí)，長時(shí)間保存需置-70℃。對(duì)于在凍融過程中易失去感染性的標(biāo)本，凍存時(shí)應(yīng)加入適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)劑如甘油或二甲基亞砜等?！　。ㄈ?biāo)

11、本處理 根據(jù)不同種類的標(biāo)本，運(yùn)用不同的處理方法。凝固的血液需先離心，得到的血清可以用于病毒分離。肝素抗凝全血、腦脊液、胸腔液、水痘液以及尿液均可直接用于病毒分離培養(yǎng)。有些標(biāo)本如糞便等，常需粗提、提純和濃縮等復(fù)雜處理過程。</p><p>　　二、分離培養(yǎng)與鑒定　　（一）分離培養(yǎng)　　1.組織培養(yǎng) 包括器官培養(yǎng)、組織塊培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)。前兩者只是在分離某些特殊病毒時(shí)需要，目前常用的方法是細(xì)胞培養(yǎng)。關(guān)鍵是針對(duì)不同的欲

12、檢測(cè)病毒，選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)根據(jù)細(xì)胞的來源、染色特征及傳代次數(shù)主要分3種類型：①原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)；②二倍體細(xì)胞株；③傳代細(xì)胞系?！　?.雞胚接種 雞胚常用于黏液病毒、皰疹病毒、痘類病毒等的原代分離。根據(jù)病毒種類的不同，接種雞胚的部位也各異。如乙型腦炎病毒以接種卵黃囊為最佳，羊膜腔和尿囊腔適合于流感病毒和腮腺炎病毒，絨毛尿囊膜對(duì)痘類病毒和皰疹病毒形成痘瘡非常敏感?！　?.動(dòng)物接種 實(shí)驗(yàn)室常用新生小鼠或乳鼠進(jìn)行病毒分離。根據(jù)

13、病毒種類不同，需選擇相應(yīng)的敏感動(dòng)物，還需接種相應(yīng)的合適部位（鼻內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、腦內(nèi)、腹腔內(nèi)、靜脈等）。如嗜神經(jīng)病毒（流行性乙型腦炎病毒），最好接種小鼠腦內(nèi)。</p><p>　?。ǘ┎《捐b定　　1.初步鑒定 根據(jù)臨床癥狀、流行病學(xué)特點(diǎn)、標(biāo)本來源、易感動(dòng)物范圍、細(xì)胞病變特征及生物學(xué)特征、理化性質(zhì)可初步判斷病毒的科及屬。如B組柯薩奇病毒僅對(duì)新生乳鼠有致病性，而對(duì)成年小鼠無致病性，腺病毒可使細(xì)胞腫脹，顆粒增多，病變

14、細(xì)胞聚集成葡萄狀。核酸類型測(cè)定可將DNA病毒與RNA病毒進(jìn)行區(qū)分，耐酸試驗(yàn)可將腸道病毒與鼻病毒大致區(qū)分開。　　2.最終鑒定 在初步鑒定的基礎(chǔ)上，選擇適當(dāng)?shù)难鍖W(xué)方法對(duì)病毒分離株進(jìn)行最后鑒定，方法是將分離到的病毒和已知病毒的參考血清學(xué)試驗(yàn)。血清學(xué)診斷方法很多，常用的有中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)、酶免疫試驗(yàn)等。　　現(xiàn)在分子生物學(xué)方法也在病毒鑒定方面得到應(yīng)用。</p><p>　　三、快速診

15、斷　?。ㄒ唬╋@微鏡檢查　　1.用光學(xué)顯微鏡直接檢查病毒包涵體。在普通光學(xué)顯微鏡下，胞質(zhì)或胞核內(nèi)的包涵體呈現(xiàn)嗜酸或嗜堿性染色，大小和數(shù)量不等。包涵體檢查可作為病毒感染的輔助診斷，不是特異性試驗(yàn)?！　?.用電子顯微鏡直接檢查病毒顆粒，數(shù)小時(shí)即可從病毒形態(tài)上作出明確的鑒別診斷。應(yīng)用免疫電鏡靈敏度更高。　?。ǘ┎《究乖瓩z查 利用特異性免疫血清檢測(cè)標(biāo)本中的病毒抗原。常用方法有：免疫熒光技術(shù)、酶免疫技術(shù)等。此外還有放射免疫法、反相間接血凝

16、和對(duì)流免疫電泳等方法。對(duì)于一些血清型別不多或在一般細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中尚不能成功增殖的病毒，直接檢測(cè)病毒抗原是快速而實(shí)用的方法。</p><p>　?。ㄈ┎《究贵w檢查 利用特異性抗原檢測(cè)病毒感染者血清中的IgM和IgG抗體。常用的方法有中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)及免疫擴(kuò)散等，還可以利用放射免疫法及酶聯(lián)免疫吸附法。IgM抗體出現(xiàn)在病毒感染的早期，所以標(biāo)本采集時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響很大。IgG抗體檢測(cè)需采集感染急

17、性期與恢復(fù)期雙份血清，恢復(fù)期IgG效價(jià)必須比急性期增高4倍或4倍以上時(shí)，才有診斷意義?！　。ㄋ模┎《竞怂釞z測(cè) 利用核酸雜交和PCR技術(shù)檢測(cè)病毒特異基因片段。但檢出病毒核酸并不等于檢出具有傳染性的病毒顆粒。</p><p>　　第三節(jié)　各類病毒感染的簡(jiǎn)介</p><p>　　一、呼吸道病毒　?。ㄒ唬┝餍行愿忻安《尽　?.生物學(xué)性狀　?。?）形態(tài)與結(jié)構(gòu)：流感病毒屬正黏病毒科。病毒顆粒具

18、有多形性，一般為球形或絲狀，絲狀多見于新分離株，感染性較強(qiáng)。其結(jié)構(gòu)由內(nèi)至外為?！　?）核心：位于病毒最內(nèi)層，是由核酸和核蛋白組成，流感病毒的核酸為分節(jié)段的單負(fù)股RNA，節(jié)段間易發(fā)生基因重組，從而引起變異；核蛋白為型特異性抗原，抗原性穩(wěn)定，很少發(fā)生變異?！　?）基質(zhì)蛋白（M蛋白）：位于包膜與核心之間具有保護(hù)核心與維持病毒外形的作用。其抗原性穩(wěn)定，具有型特異性?！　?）包膜：位于M蛋白外面的脂質(zhì)雙層，含有宿主細(xì)胞膜成分，其中鑲嵌有突出

19、于病毒表面的兩種結(jié)構(gòu)蛋白，一種為血凝素（HA），另一種為神經(jīng)氨酸酶（NA）。其抗原性是劃分流感病毒亞型的依據(jù)。</p><p>　?。?）分型與變異　　1）分型：根據(jù)核蛋白抗原和M蛋白的不同，將流感病毒分為甲（A）、乙（B）、丙（C）型，甲型流感病毒根據(jù)NA和HA的抗原性不同又分為若干亞型?！　?）變異：流感病毒易發(fā)生變異，變異的物質(zhì)基礎(chǔ)是HA和NA，兩者變異可同時(shí)出現(xiàn)，也可單獨(dú)出現(xiàn)?？乖儺惙刃r(shí)稱為抗原

20、漂移，如果變異幅度大形成新的亞型，一般引起大規(guī)模流行，這稱為抗原轉(zhuǎn)變?！　。?）培養(yǎng)特性：流感病毒常用雞胚接種培養(yǎng)，初次分離接種羊膜腔為最佳，傳代適應(yīng)后可移種尿囊腔。細(xì)胞培養(yǎng)一般用原代猴腎細(xì)胞（PMK）或犬腎傳代細(xì)胞（MDCK）。利用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)確定病毒的存在?！　。?）抵抗力：不耐熱，對(duì)干燥、日光、紫外線以及甲醛、乙醇等均敏感。</p><p>　　2.微生物檢驗(yàn)　?。?）標(biāo)本采集和處理：在發(fā)病急性期，

21、以前3天為最好。合理采集相應(yīng)標(biāo)本，如鼻腔洗液、咽拭子、鼻拭子等，置于Hanks液中。采集的標(biāo)本應(yīng)立即放入冰壺中，速送實(shí)驗(yàn)室。若48小時(shí)內(nèi)未能進(jìn)行接種，標(biāo)本應(yīng)放于低溫中保存?！　。?）分離培養(yǎng)與鑒定：標(biāo)本置于Hanks液中加抗生素處理，將處理的標(biāo)本接種于雞胚羊膜腔，35℃3天后，收集羊水和尿囊液進(jìn)行血凝試驗(yàn)并測(cè)定滴度。血凝陽性者，用已知抗體作血凝抑制試驗(yàn)進(jìn)行鑒定。若血凝陰性時(shí)，需用雞胚盲傳1～2次，仍不出現(xiàn)血凝陽性者，方可判斷病毒分離陰

22、性。也可接種原代猴腎細(xì)胞（PMK）或犬腎傳代細(xì)胞（MDCK）進(jìn)行培養(yǎng)。</p><p>　　（3）快速診斷　　1）免疫熒光技術(shù)和酶免疫技術(shù)?！　?）分子雜交技術(shù)?！　?）PCR技術(shù)?！　?）免疫電鏡技術(shù)。　?。?）血清學(xué)診斷：需同時(shí)檢測(cè)急性期（5天以內(nèi)）和恢復(fù)期（2～4周）血清，在相同條件下進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)，如恢復(fù)期抗體效價(jià)比急性期髙4倍或4倍以上即有診斷意義。　　3.臨床意義 流感病毒是在呼吸道柱狀

23、上皮細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，病毒隨飛沫傳播進(jìn)入易感者呼吸道，依靠血凝素與黏膜柱狀上皮細(xì)胞相應(yīng)受體結(jié)合，感染細(xì)胞。主要在呼吸道增殖，很少入血，但代謝毒素樣物質(zhì)可進(jìn)入血流引起發(fā)熱、頭痛和全身酸痛。甲型流感可以是散發(fā)，也可以是全球性大流行。乙型流感的播散速度及范圍不如甲型。1997年在香港確診有人感染H5N1禽流感病毒。</p><p>　　（二）副流感病毒　　1.生物學(xué)性狀 屬副黏病毒科、副黏病毒亞科、副黏病毒屬。形態(tài)結(jié)構(gòu)類似

24、流感病毒，但體積較大，其核酸為單負(fù)股RNA，不分節(jié)段。包膜上嵌有兩種糖蛋白刺突，一種為HN（hemagglutinin neuraminidase），具有血凝和神經(jīng)氨酸酶活性。具有流感病毒HA的吸附作用，另一種為F（fusion）具有使病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞和使病毒在宿主細(xì)胞之間傳播的作用。副流感病毒抵抗力弱，不耐酸，對(duì)熱敏感。</p><p>　　2.微生物檢驗(yàn)　　（1）標(biāo)本采集和處理：采集發(fā)病早期標(biāo)本，成人可采取

25、鼻咽分泌物及咽嗽液標(biāo)本，年幼患者可用咽拭子涂咽后壁，然后放入2ml收集液中，攪拌后，立即接種細(xì)胞?！　。?）分離培養(yǎng)：最敏感的細(xì)胞是原代人胚腎和原代猴腎細(xì)胞?！　。?）病毒鑒定：最常用的方法是紅細(xì)胞吸附抑制試驗(yàn)，亦可用血凝抑制試驗(yàn)，中和試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)對(duì)病毒進(jìn)行鑒定?！　。?）直接檢測(cè)病毒抗原：常用方法有間接免疫熒光法，也可用ELISA、放射免疫和電鏡技術(shù)直接檢測(cè)標(biāo)本中的病毒抗原?！　。?）血清學(xué)診斷：由于副流感病毒各型之間，

26、以及與其他病毒之間存在某些共同抗原，血清學(xué)試驗(yàn)常有交叉反應(yīng)。故利用血清學(xué)診斷往往很困難?！　?.臨床意義 副流感病毒經(jīng)感染者呼吸道分泌物通過人與人密切接觸或氣溶膠傳播，可引起兒童和成人上呼吸道感染，副流感病毒可分為4個(gè)型，其中1型和2型是主要的致病因子，而且?？梢鹣?。3型常引起下呼吸道感染，4型只引起輕型上呼吸道感染。</p><p>　?。ㄈ┖粑篮习《尽　?.生物學(xué)性狀 屬副黏病毒科、肺病毒亞科、

27、肺病毒屬。電鏡負(fù)染色呈球形，單個(gè)病毒顆粒具有多形性。核酸為單負(fù)股RNA，不分節(jié)段。包膜上的G蛋白作用類似于流感病毒的血凝素蛋白HA，包膜上的F蛋白是融合蛋白，介導(dǎo)病毒穿入和細(xì)胞融合。G、F蛋白均具有較強(qiáng)的免疫原性，能刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體。在中和病毒方面，抗F抗體比抗G抗體更強(qiáng)?！　?.微生物檢驗(yàn)　?。?）標(biāo)本采集和處理：可采用鼻腔洗液或鼻咽拭子，置轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中冷藏（4℃）運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室，盡可能立即接種?！　。?）分離培養(yǎng)與鑒定：呼吸

28、道合胞病毒，不能在雞胚中增殖，可在人類上皮細(xì)胞傳代細(xì)胞系內(nèi)增殖。細(xì)胞病變一般在培養(yǎng)后3～7天出現(xiàn)，細(xì)胞病變特點(diǎn)為合胞體形成即細(xì)胞融合成多核巨細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)形成嗜酸性包涵體?！　。?）直接檢測(cè)病毒抗原：可利用免疫熒光技術(shù)和酶免疫技術(shù)直接檢測(cè)標(biāo)本中的病毒抗原?！　。?）血清學(xué)診斷：常用中和試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)和酶免疫試驗(yàn)檢查血清中IgG、IgM及IgA。中和試驗(yàn)需雙份血清，檢測(cè)IgG滴度變化。檢測(cè)患者IgM、IgA可進(jìn)行早期診斷。　　3.

29、臨床意義 是引起嬰幼兒下呼吸道疾病的最常見的病毒。最</p><p>　?。ㄋ模┫俨《尽　? 生物學(xué)性狀是中等大小的無包膜病毒，核心為單一線形雙股DNA。核衣殼呈20面體立體對(duì)稱。腺病毒不能在雞胚中增殖，只能在人源的組織細(xì)胞中增殖。細(xì)胞病變?yōu)槟[脹、變形、聚集成葡萄串狀，細(xì)胞核中形成嗜堿性包涵體。腺病毒對(duì)酸和乙醚不敏感，對(duì)低溫耐受，但56℃30分鐘可被滅活。　　2.微生物檢驗(yàn)　?。?）標(biāo)本采集：在患者急性期內(nèi)

30、采集標(biāo)本，如鼻咽拭子、鼻咽吸取物、直腸拭子、尿道拭子或?qū)m頸拭子及活檢組織等。快速送檢，快速檢查。　?。?）直接檢測(cè)病毒抗原：可以利用電鏡或免疫電鏡檢查，也可以利用免疫熒光技術(shù)及酶免疫技術(shù)，如EIA進(jìn)行病毒抗原檢測(cè)。還可利用PCR技術(shù)或核酸探針進(jìn)行鑒定。</p><p>　　（3）病毒分離與鑒定：適合于腺病毒分離的細(xì)胞有傳代人細(xì)胞系HeLa、KB、A549以及原代人胚腎細(xì)胞等。將處理好的臨床標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞接種，接種

31、后24小時(shí)內(nèi)換培養(yǎng)液一次，避免細(xì)胞毒效應(yīng)。以后原代細(xì)胞7天左右換液一次，傳代細(xì)胞3～4天換液一次，每日在鏡下觀察是否有細(xì)胞病變出現(xiàn)。以上直接檢測(cè)病毒抗原的方法均可進(jìn)行病毒鑒定。一般用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)和EIA試驗(yàn)對(duì)腺病毒進(jìn)行分屬。以中和試驗(yàn)或血凝抑制試驗(yàn)進(jìn)行血清型鑒定?！　。?）血清學(xué)診斷：方法有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，酶免疫測(cè)定及血凝抑制試驗(yàn)及血清中和試驗(yàn)等?！　?.臨床意義 腺病毒感染可常年流行，在人體各器官均有發(fā)現(xiàn)，常引起呼吸道疾病，上呼吸道

32、感染多見普通感冒、咽炎、扁桃體炎。下呼吸道疾病有支氣管炎、細(xì)支氣管炎和肺炎。腺病毒感染后，機(jī)體可獲得對(duì)同型病毒的持久免疫力。</p><p>　　（五）麻疹病毒　　1.生物學(xué)性狀 屬副黏病毒科、麻疹病毒屬。病毒呈球形，核心為單負(fù)鏈RNA，三種衣殼蛋白（L、P、N），外被包膜，包膜內(nèi)面為M蛋白，包膜表面有血凝素（H蛋白）和融合蛋白（F）。H蛋白與細(xì)胞表面病毒受體CD46結(jié)合，感染宿主。病毒抵抗力不強(qiáng)，對(duì)陽光和一般

33、消毒劑敏感?！　?.微生物檢驗(yàn)　?。?）標(biāo)本采集：在患者急性期內(nèi)采集標(biāo)本，如鼻咽拭子、鼻咽吸取物、痰液等?！　。?）直接檢測(cè)病毒：HE或Wright染色可見受感染細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞融合和多核巨細(xì)胞，胞質(zhì)和胞核內(nèi)有嗜酸性包涵體。可以利用電鏡或免疫電鏡檢查病毒顆粒，也可以利用免疫熒光技術(shù)及酶免疫技術(shù)，如EIA進(jìn)行病毒抗原檢測(cè)。還可利用PCR技術(shù)或核酸探針進(jìn)行鑒定。</p><p>　?。?）病毒分離與鑒定：將處理好的

34、臨床標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞接種，接種傳代細(xì)胞系HeLa、Vero以及原代人胚腎細(xì)胞等。鏡下觀察是否有細(xì)胞病變出現(xiàn)。以上直接檢測(cè)病毒抗原的方法均可進(jìn)行病毒鑒定?！　。?）血清學(xué)診斷：雙份血清作補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，酶免疫測(cè)定及血凝抑制試驗(yàn)等。此外用ELISA法檢測(cè)血清特異性IgM可協(xié)助診斷。　　3.臨床意義 麻疹是兒童時(shí)期最常見的急性呼吸道傳染病。病毒通過飛沫直接傳播，冬春季易發(fā)。病毒侵入上呼吸道和瞼結(jié)膜上皮細(xì)胞內(nèi)增殖，通過局部淋巴組織入血，出現(xiàn)第一次

35、病毒血癥，病毒隨血流侵入全身淋巴組織和單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)增殖，再次入血形成第二次病毒血癥，并感染瞼結(jié)膜、皮膚、口腔黏膜、呼吸道、消化道、血管等。麻疹病毒還可引起較為少見的遠(yuǎn)期并發(fā)癥是亞急性硬化性全腦炎（SSPE）。</p><p>　?。╋L(fēng)疹病毒　　1.生物學(xué)性狀 病毒呈球形，核心為單正鏈RNA，外被包膜。包膜表面有血凝素。病毒能在綠猴腎、兔腎和人胚腎細(xì)胞內(nèi)增殖。病毒抵抗力不強(qiáng)，不耐熱，對(duì)脂溶劑敏感，紫外線能

36、滅活病毒?！　?.微生物檢驗(yàn)　　（1）標(biāo)本采集：在早期采集標(biāo)本，如咽拭子、皮疹液、尿液以及死亡嬰兒的各種臟器等?！　。?）直接檢測(cè)病毒：利用PCR技術(shù)或核酸探針進(jìn)行鑒定?！　。?）病毒分離與鑒定：將處理好的臨床標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞接種，接種非洲綠猴腎Vero以及原代人胚腎細(xì)胞等。鏡下觀察是否有細(xì)胞病變出現(xiàn)。用酶標(biāo)或熒光素標(biāo)記的單克隆抗體進(jìn)行病毒鑒定。　?。?）血清學(xué)診斷：雙份血清作血凝抑制試驗(yàn)等。用ELISA法檢測(cè)血清特異性IgM可協(xié)

37、助診斷?；純撼錾鷷r(shí)血清中有抗風(fēng)疹病毒IgM抗體和從母體獲得的IgG抗體，或?qū)m內(nèi)羊水中有IgM抗體可判定為先天性風(fēng)疹綜合征?！　?.臨床意義 風(fēng)疹是要注意全身麻疹樣出疹伴耳后及枕下淋巴結(jié)腫大為特征的急性呼吸道傳染病。病毒在局部淋巴結(jié)增殖后，通過病毒血癥播撒全身。孕婦在妊娠早期感染病毒，經(jīng)胎盤垂直傳播感染胎兒，可引起先天性風(fēng)疹綜合征。胎兒出生后患先天性心臟病、耳聾、失明、智力障</p><p>　?。ㄆ撸┕跔畈《?

38、冠狀病毒可能是成人和較大兒童上呼吸道感染的重要病因。主要引起普通感冒和咽炎。大約10%～30%的普通感冒由該病毒引起。嚴(yán)重急性呼吸綜合征（SARS）病毒可能是冠狀病毒變種所致。　?。ò耍┣萘鞲胁《?禽流感病毒是甲型流感病毒的一種亞型，可引起禽流行性感冒。目前發(fā)現(xiàn)最易感染人類的高致病性禽流感病毒亞型有H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3等，其中感染H5N1亞型的患者病情嚴(yán)重，致死率高。　　個(gè)別感染禽流感的原因可能是發(fā)生了變

39、異的病毒。變異的可能性一是兩種以上的病毒進(jìn)入同一細(xì)胞發(fā)生重組；二是病毒基因位點(diǎn)由于某種因素的影響而發(fā)生突變使病毒獲得了感染人的能力?！　∨R床變現(xiàn)為急性發(fā)病，早期表現(xiàn)類似普通流感?！　〕Ｒ?guī)采集全血、死亡動(dòng)物的內(nèi)臟等。采用雞胚培養(yǎng)法分離病毒。也可作病毒抗原、抗體及核酸的檢測(cè)。　　</p><p>　　二、腸道病毒　　腸道病毒屬小RNA病毒科腸道病毒屬。由糞-口途徑傳播。主要包括脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇病毒、?？?/p>

40、病毒和一些新腸道病毒。　?。ㄒ唬┥飳W(xué)性狀 腸道病毒由簡(jiǎn)單的病毒衣殼和單股RNA組成。能在猴腎、人胚腎、人羊膜細(xì)胞、HEP-2、HeLa細(xì)胞中增殖，最適生長溫度為36～37℃，腸道病毒對(duì)外界抵抗力較強(qiáng)，在污水及糞便中可生存數(shù)月。對(duì)酸及乙醚穩(wěn)定，對(duì)紫外線、干燥及熱敏感，56℃30分鐘可滅活。</p><p>　?。ǘ┪⑸餀z驗(yàn)　　1.標(biāo)本的采集與處理 合理采集相應(yīng)標(biāo)本，如腦脊液、血液、尿液、直腸拭子、咽喉拭子

41、、鼻腔洗液等，將液體標(biāo)本置無菌試管內(nèi)立即送檢。將拭子標(biāo)本最好先放在運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)立即送檢。收集急性期與恢復(fù)期的全血，分離血清置-20℃保存供檢測(cè)抗體用?！　?.直接檢測(cè)病毒 電鏡檢查及酶免疫法均可直接檢測(cè)腸道病毒。但PCR在腸道病毒檢測(cè)方面更具優(yōu)勢(shì)?！　?.病毒分離 猴細(xì)胞系對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒，B組柯薩奇病毒和ECHO病毒具有良好的敏感性。人類二倍體成纖維細(xì)胞，如WI-38和HELF適合于A組柯薩奇病毒的分離。將不同的標(biāo)本進(jìn)行相應(yīng)的處理

42、，接種至細(xì)胞培養(yǎng)中?！　?.病毒鑒定 可用中和試驗(yàn)進(jìn)行病毒鑒定，此為鑒定的標(biāo)準(zhǔn)方法。此外還可利用PCR及免疫熒光法進(jìn)行快速鑒定?！　?.血清學(xué)診斷 常用方法有中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)及血凝抑制試驗(yàn)。三種試驗(yàn)只有中和試驗(yàn)較特異，但操作繁瑣。故血清學(xué)試驗(yàn)在腸道病毒診斷方面的作用極其有限。</p><p>　?。ㄈ┡R床意義 腸道病毒是人類最常見最重要的病毒。腸道病毒雖然以感染胃腸道作為開始，但卻很少引起胃腸道疾病。

43、病毒的靶器官以神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉和其他系統(tǒng)為主。其中脊髓灰質(zhì)炎病毒可損害脊髓前腳運(yùn)動(dòng)神經(jīng)細(xì)胞，導(dǎo)致脊髓灰質(zhì)炎即小兒麻痹癥。　　柯薩奇病毒、ECHO病毒等感染與脊髓灰質(zhì)炎病毒感染相似，以幼年兒童最常見。發(fā)病率和嚴(yán)重性隨年齡增長而降低。多數(shù)感染沒有癥狀或僅有非特異性發(fā)熱，極少數(shù)患者出現(xiàn)無菌性腦膜炎和輕癱等癥狀?？滤_奇病毒還可引起手足口病、心肌炎和心包炎、急性結(jié)膜炎等?！　≡诩S便中有腸道病毒排除時(shí)，多數(shù)患者往往無任何癥狀。而在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血

44、液、瞼結(jié)膜分泌物和泌尿生殖道等部位的標(biāo)本中檢出腸道病毒，就意味著真正的病毒侵入。</p><p>　　三、急性胃腸炎病毒　　輪狀病毒　　1.生物學(xué)性狀 輪狀病毒呈球形，核心含雙鏈RNA，外被雙層衣殼，內(nèi)層核衣殼的殼粒呈放射狀排列，電鏡下猶如車輪狀外形。常用的細(xì)胞為原代猴腎細(xì)胞和傳代猴腎細(xì)胞。病毒抵抗力強(qiáng)，耐酸堿，耐乙醚。56℃30分鐘可滅活。可被消毒劑滅活。　　2.微生物檢驗(yàn)　?。?）標(biāo)本采集與處理：發(fā)病

45、早期采集腹瀉糞便，密封送檢?！　。?）標(biāo)本直接檢查：　　1）電鏡和免疫電鏡檢查　　2）抗原檢測(cè) 常用ELISA法、膠乳凝集試驗(yàn)　　3）病毒RNA聚丙烯酰胺凝膠電泳分析用于病毒分型?！　?）檢測(cè)核酸　?。?）分離培養(yǎng)　　3.臨床意義 輪狀病毒是引起嬰幼兒急性腹瀉的主要病因。在發(fā)展中國家發(fā)病率高。其發(fā)病和嬰幼兒病死率僅次于呼吸道感染。A組感染引起嬰幼兒急性胃腸炎，感染以溫帶地區(qū)的秋冬季為主。B組引起成人腹瀉，無明顯季節(jié)性。&l

46、t;/p><p>　　四、黃病毒　　黃病毒曾歸類為蟲媒病毒B組。此類病毒是指一大群通過吸血的節(jié)肢動(dòng)物而傳播疾病的病毒。　?。ㄒ唬┝餍行砸倚湍X炎病毒　　1.生物學(xué)性狀病毒基因組為單正鏈RNA。流行性乙型腦炎病毒簡(jiǎn)稱乙腦病毒，其結(jié)構(gòu)蛋白有三種：M、C和E?！　?.微生物檢驗(yàn)　　（1）標(biāo)本直接檢查：利用免疫熒光技術(shù)及酶免疫技術(shù)進(jìn)行病毒抗原檢測(cè)。還可利用PCR技術(shù)或核酸探針檢測(cè)核酸?！　。?）分離培養(yǎng)與鑒定：將患

47、者血清或死亡患者腦組織懸液上清接種乳鼠腦內(nèi)，接種后幾天便死亡，進(jìn)一步傳代或鑒定。也可將正確處理的標(biāo)本接種原代金色地鼠腎細(xì)胞等細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞病變、紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)證實(shí)病毒的增殖，陽性即可傳代或鑒定。動(dòng)物接種或細(xì)胞培養(yǎng)陽性者以中和試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)等進(jìn)行鑒定?！　。?）血清學(xué)診斷：可以利用血凝抑制、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等進(jìn)行血清學(xué)診斷?！　?.臨床意義 流行性乙型腦炎病毒可通過三帶喙庫蚊叮咬傳播，引起流行性乙型腦炎，簡(jiǎn)稱乙腦。豬為最重要的

48、宿主和傳染源。病毒流行主要在夏秋季節(jié)。人類感染后，絕大多數(shù)表現(xiàn)為隱性或輕型感染。只有少數(shù)發(fā)生腦炎。病毒侵入腦組織內(nèi)增殖，造成腦實(shí)質(zhì)病變，表現(xiàn)為高熱、驚厥或昏迷癥狀</p><p>　?。ǘ┥帜X炎病毒　　1.生物學(xué)特性 森林腦炎病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)與乙腦病毒近似。最易感染的動(dòng)物為小鼠?？稍谠u胚細(xì)胞和傳代地鼠細(xì)胞培養(yǎng)中生長并引起病變。雞胚接種能在卵黃囊、絨毛尿囊膜增殖，該病毒抗原性穩(wěn)定?！　?.微生物檢驗(yàn) 與乙

49、型腦炎病毒相似?！　?.臨床意義 森林腦炎病毒可經(jīng)蜱傳播，引起人類森林腦炎。森林硬蜱為主要傳播媒介和儲(chǔ)存宿主。亦可經(jīng)胃腸道傳播。人類感染后，有相當(dāng)一部分表現(xiàn)為隱性感染，發(fā)病者潛伏期約10～14天，然后出現(xiàn)高熱、頭痛、腦膜刺激征、昏迷等。</p><p>　?。ㄈ┑歉锊《尽　?.生物學(xué)性狀 病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)與乙腦病毒相似，根據(jù)抗原性不同，可分為1、2、3、4，四個(gè)血清型。該病毒可用蚊體胸內(nèi)接種培養(yǎng)，也可用白紋伊蚊

50、的傳代細(xì)胞（C6/36株）或地鼠腎細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，可以用初生小鼠進(jìn)行動(dòng)物接種?！　?.微生物檢驗(yàn) 取患者第1～3天的血清接種白紋伊蚊C6/36株細(xì)胞等以分離病毒。患者感染1周后血清中可出現(xiàn)血凝抑制抗體，通過測(cè)定早期與恢復(fù)期血清標(biāo)本來觀察抗體滴度是否呈4倍以上增高。如果有4倍或4倍以上增高則有診斷意義，也可利用ELISA及斑點(diǎn)免疫測(cè)定法檢測(cè)特異性IgM抗體，這有助于登革熱的早期診斷。　　3.臨床意義 登革病毒儲(chǔ)存于人類和猴，通過埃及伊蚊

51、和白紋伊蚊等傳播。病毒感染人體后，可在毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和單核細(xì)胞中增殖，然后經(jīng)血液播散，引起發(fā)熱、肌肉和關(guān)節(jié)酸痛、淋巴結(jié)腫脹及皮膚出血、休克等。臨床上分為普通型登革熱和登革出血熱/登革休克綜合征兩個(gè)類型。前者病情較輕，后者病情較重。</p><p>　　五、皰疹病毒　?。ㄒ唬﹩渭儼捳畈《荆℉SV）　　1.生物學(xué)性狀 單純皰疹病毒為有包膜的DNA病毒，基因組由兩個(gè)互相連接的長片段（L）和短片段（S）組成，為雙股

52、線狀DNA。該病毒能在多種細(xì)胞內(nèi)增殖，如原代兔腎、人胚肺、人胚腎細(xì)胞或地鼠腎細(xì)胞等。細(xì)胞被感染后很快發(fā)生病變。如細(xì)胞腫脹、變圓、出現(xiàn)嗜酸性核內(nèi)包涵體。該病毒可感染的動(dòng)物種類較多，如家兔、豚鼠、小鼠等。該病毒有兩種血清型，HSV-1和HSV-2。兩型病毒的DNA有5%同源性。</p><p>　　2.微生物檢驗(yàn)　?。?）標(biāo)本采集和處理：合理采集相應(yīng)標(biāo)本，如水皰液、唾液、尿液、血液、腦脊液、陰道或?qū)m頸拭子等。標(biāo)本應(yīng)

53、立即接種敏感細(xì)胞培養(yǎng)液，如果不能則將標(biāo)本置于轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，快速送檢?！　。?）直接檢查病毒：采用皰疹液、皮膚黏膜病灶刮取物、活檢組織等，利用免疫電鏡檢查病毒顆粒或病變細(xì)胞，也可用吉姆薩染色，在光學(xué)顯微鏡下檢查多核巨細(xì)胞和胞核內(nèi)嗜酸性包涵體。將標(biāo)本制成涂片，采用直接免疫熒光法或酶免疫法進(jìn)行病毒抗原檢測(cè)?！　。?）分離及鑒定：病毒分離培養(yǎng)是HSV感染實(shí)驗(yàn)室診斷的最敏感的方法，HSV-1和HSV-2在細(xì)胞培養(yǎng)中均可出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變?？梢岳?/p>

54、用單克隆抗體確定HSV分離株的型別。　?。?）分子生物學(xué)診斷：可利用核酸雜交技術(shù)或PCR技術(shù)檢測(cè)出HSV?！　。?）血清學(xué)診斷：應(yīng)用ELISA或膠乳凝集試驗(yàn)可檢測(cè)HSV抗體，但由于HSV-1和HSV-2的廣泛交叉反應(yīng)，該試驗(yàn)難以區(qū)分兩型的感染。由于HSV抗體出現(xiàn)的特點(diǎn)，血清學(xué)試驗(yàn)無助于早期診斷及指導(dǎo)抗病毒治療。</p><p>　　3.臨床意義 HSV感染可通過直接密切接觸和性接觸傳播，也可經(jīng)飛沫及垂直傳播。

55、HSV-1感染常局限在口咽部，通過唾液或呼吸道分泌物傳播，引起口咽部皰疹、皰疹性角結(jié)膜炎、腦炎等。HSV-1的原發(fā)感染多見于半歲以后的嬰幼兒，大多數(shù)呈隱性感染。HSV-2的原發(fā)感染多見于青春期以后的患者，主要通過生殖道途徑傳播，主要表現(xiàn)為生殖器皰瘆。孕婦在胎兒胚胎期感染HSV，有引起流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎或先天畸形、智力低下等危險(xiǎn)。</p><p>　?。ǘ┧?帶狀皰疹病毒　　1.生物學(xué)性狀 水痘帶狀皰疹病毒（V

56、ZV）的基本特性與HSV相似。此病毒只有一個(gè)血清型，為線狀雙股DNA病毒。一般實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及雞胚對(duì)VZV均不敏感。VZV能在人胚二倍體腎細(xì)胞（HFDK）或人胚二倍體肺細(xì)胞（HFDL）培養(yǎng)中增殖。受感染的細(xì)胞出現(xiàn)嗜酸性核內(nèi)包涵體和多核巨細(xì)胞?！　?.微生物檢驗(yàn)　　（1）直接檢測(cè)病毒或抗原：刮取新鮮病灶基底部細(xì)胞涂片，用直接或間接免疫熒光法檢測(cè)病變細(xì)胞內(nèi)的VZV抗原，有助于快速診斷。利用皰疹液進(jìn)行免疫電鏡檢查，可對(duì)VZV感染進(jìn)行特異性診斷。

57、利用核酸雜交或PCR技術(shù)亦可檢出皰疹液中的VZV?！　。?）病毒分離：取水痘內(nèi)容物（要求4天以內(nèi)的內(nèi)容物）肺炎及腸炎活檢組織接種人胚腎或人胚肺細(xì)胞。多數(shù)情況下3～7天可出現(xiàn)細(xì)胞病變效應(yīng)?！　。?）鑒定：根據(jù)典型細(xì)胞病變效應(yīng)進(jìn)行初步鑒定，利用標(biāo)記的抗VZV的單克隆抗體進(jìn)行直接熒光抗體染色，進(jìn)行特異性鑒定?！　。?）血清學(xué)診斷：過去常用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，近年來EIA已成為VZV血清學(xué)診斷的主要方法?！　?.臨床意義 VZV可引起水痘和帶

58、狀皰疹。前者為原發(fā)感染引起，后者為復(fù)發(fā)感染所致。水痘主</p><p>　　（三）巨細(xì)胞病毒　　1.生物學(xué)性狀 巨細(xì)胞病毒（CMV）的形態(tài)與基因組結(jié)構(gòu)與HSV極為相似，但病毒感染的宿主范圍及細(xì)胞范圍均狹窄，且種屬特異性高，即人CMV（HCMV）只能感染人。體外培養(yǎng)HCMV只有在人成纖維細(xì)胞中才能增殖。病毒在細(xì)胞培養(yǎng)中增殖緩慢，初次分離需經(jīng)2～6周才可出現(xiàn)細(xì)胞病變，細(xì)胞病變特點(diǎn)為腫脹、核變大形成巨大細(xì)胞，核內(nèi)有致

59、密的嗜堿性包涵體，形似貓頭鷹眼特征。加熱56℃30分鐘，低pH、乙醚、紫外線、反復(fù)凍融均能使CMV滅活。</p><p>　　2.微生物檢驗(yàn)　?。?）標(biāo)本采集：病毒分離可采取患者尿液、口腔拭子、外周血白細(xì)胞等。血清學(xué)診斷可采取患者血清?！　。?）直接檢查病毒：活檢組織切片或其他標(biāo)本涂片，用HE等染色觀察巨大細(xì)胞和細(xì)胞核內(nèi)的包涵體。也可利用免疫熒光技術(shù)檢查標(biāo)本中的HCMV抗原，亦可利用酶免疫法檢查。利用核酸雜交

60、或PCR技術(shù)檢測(cè)HCMV的核酸。　?。?）分離與鑒定：人成纖維細(xì)胞適合于HCMV增殖，將處理后的標(biāo)本接種于生長旺盛的單層細(xì)胞，定期換液，定期觀察。檢查細(xì)胞病變效應(yīng)出現(xiàn)與否。利用單克隆或多克隆相應(yīng)抗體對(duì)分離培養(yǎng)出的病毒進(jìn)行間接免疫熒光法鑒定。　?。?）血清學(xué)診斷：常利用ELISA或IFA來檢測(cè)HCMV IgG抗體或IgM抗體。</p><p>　　3.臨床意義　　由于CMV可存在唾液、尿液、乳汁、淚液、糞便、

61、陰道或?qū)m頸分泌物、血液、精液中，因此病毒可通過多種途徑傳播。有先天性或獲得性細(xì)胞免疫缺陷的兒童或成人，如艾滋病及器官移植患者，CMV感染很常見?！　。?）正常人感染：人群中HCMV感染非常廣泛，通常呈現(xiàn)隱性感染，少數(shù)出現(xiàn)傳染性單核細(xì)胞增多癥?！　。?）免疫功能缺損個(gè)體的感染：高危人群包括器官移植的受者、接受化療放療的惡性腫瘤患者等。HCMV感染所致的間質(zhì)性肺炎是骨髓移植受者的首位死因。AIDS患者HCMV感染，以肺、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和胃

62、腸道感染最為常見?！　。?）先天性和圍生期感染　　1）先天感染：妊娠時(shí)，母體發(fā)生CMV感染，病毒經(jīng)胎盤傳至胎兒引起宮內(nèi)感染。　　2）產(chǎn)時(shí)感染：新生兒出生時(shí)，通過與產(chǎn)道中的病毒相接觸，也可被感染?！　?）產(chǎn)后感染：多數(shù)產(chǎn)后感染主要是通過與排病毒的個(gè)體密切接觸而獲得。</p><p>　?。ㄋ模〦B病毒　　1.生物學(xué)性狀 EB病毒（EBV）的形態(tài)與其他皰疹病毒相似，病毒顆粒為球形，EBV缺乏良好的體外培養(yǎng)系

63、統(tǒng)，不能用常規(guī)的皰疹病毒培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)。一般用人臍血淋巴細(xì)胞或從外周血分離的B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)?！　「鶕?jù)病毒抗原表達(dá)時(shí)所處的病毒增殖周期的不同階段，將EBV抗原分為3類。1）潛伏期表達(dá)的抗原，包括EBV核抗原（EBNA）和潛伏期膜蛋白；2）EBV增殖早期抗原（EA）；3）病毒增殖晚期抗原包括EBV衣殼抗原（VCA）及EBV包膜抗原（MA）。</p><p>　　2.微生物檢驗(yàn)　?。?）直接檢查病毒：利用抗補(bǔ)體免

64、疫熒光法檢查淋巴細(xì)胞或上皮細(xì)胞EB病毒核抗原。利用核酸雜交和PCR或RT-PCR技術(shù)檢測(cè)病毒?！　。?）病毒分離培養(yǎng)及鑒定：標(biāo)本可以是唾液、咽漱液、外周血細(xì)胞以及腫瘤組織。接種人臍帶血淋巴細(xì)胞對(duì)EB病毒進(jìn)行分離培養(yǎng)，孵育4周，病毒陽性培養(yǎng)物，通過抗補(bǔ)體免疫熒光法進(jìn)行EB鑒定?！　。?）血清學(xué)診斷：嗜異性抗體檢測(cè)可用于輔助診斷傳染性單核細(xì)胞增多癥。進(jìn)行針對(duì)病毒VCA、EA和EBNA的抗體測(cè)定，不同疾病患者的體內(nèi)針對(duì)EBV不同的抗原成分

65、所產(chǎn)生的抗體的組成及水平均有一定的特征性?！　?.臨床意義 EBV流行廣泛，幼兒感染后多數(shù)無明顯癥狀，但終生攜帶病毒，或引起輕度咽炎和上呼吸道感染。青春期發(fā)生原發(fā)感染，約有50%出現(xiàn)傳染性單核細(xì)胞增多癥。病毒主要通過唾液傳播，也可因輸血傳染。EBV主要侵犯B細(xì)胞，與EB病毒感染有關(guān)的疾病主要有：傳染性單核細(xì)胞增多癥、非洲兒童惡性淋巴瘤、鼻咽癌、霍奇金病和其他某些淋巴瘤。</p><p>　　六、肝炎病毒　?。?/p>

66、一）甲型肝炎病毒　　1.生物學(xué)性狀 甲型肝炎病毒（HAV）屬小RNA病毒科，無包膜，核心為單正股RNA。目前世界上分離的HAV均為一個(gè)血清型。HAV的抵抗力較其他小RNA病毒強(qiáng)，60℃加熱10～12小時(shí)后仍具有感染性，85℃加熱立即滅活，對(duì)乙醚、氯仿及pH為3的酸性環(huán)境有抵抗力?！　?.微生物檢驗(yàn) 甲型肝炎患者病期不長，預(yù)后良好，一般不需要進(jìn)行病原學(xué)檢查。微生物檢驗(yàn)以測(cè)定病毒抗原或抗體為主。感染早期一般可用RIA或ELISA檢測(cè)患者

67、血清中抗-HAV IgM。它出現(xiàn)早，消失快，是HAV新近感染的重要指標(biāo)。對(duì)于了解既往感染史或進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，需檢測(cè)抗-HAV IgG。也可利用ELISA或EIA、RT-PCR、核酸雜交技術(shù)直接檢測(cè)抗原?！　?.臨床意義 HAV可引起甲型肝炎，HAV主要通過糞-口傳播，傳染源多為人類，潛伏期15～50天，平均28天。病毒常在患者血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）升高前5～6天就存在于患者的血清和糞便中，2～3周后，隨血清特異性抗體的產(chǎn)生，血清和

68、糞便的傳染性逐漸消失。甲型肝炎患者的糞便污染水源、食物以及某些海產(chǎn)品，可造成散發(fā)式大流行。典型的甲型</p><p>　?。ǘ┮倚透窝撞《尽　?.生物學(xué)性狀　?。?）形態(tài)與結(jié)構(gòu)：乙型肝炎病毒（HBV）感染的患者血清，在電鏡下可見3種特有顆粒。①大球形顆粒：為具有感染性的HBV完整顆粒，呈球形，又稱Dane顆粒。它的外衣殼，相當(dāng)于一般病毒的包膜，HBV的表面抗原（HBsAg）鑲嵌于包膜的脂質(zhì)雙層中。去除病毒的

69、外衣殼，即暴露出內(nèi)衣殼，它是HBV的核心抗原（HBcAg）。用酶或去垢劑作用后，可暴露出e抗原（HBeAg）。　?、谛∏蛐晤w粒：成分為HBsAg，不含病毒核酸DNA及DNA多聚酶，無傳染性；③管型顆粒：成分亦是HBsAg，是由多個(gè)小球形顆粒“串聯(lián)而成”，也不含病毒核酸?！　BV的基因組是獨(dú)特的帶有部分單鏈區(qū)的雙鏈DNA環(huán)狀模式。長鏈為負(fù)鏈，短鏈為正鏈?；蚪M高度壓縮，重復(fù)利用。</p><p>　?。?）抗

70、原成分：HBV主要有HBsAg、HBcAg及HBeAg?！　?）HBsAg是HBV感染的主要標(biāo)志，由病毒DNA的S區(qū)編碼。　　2）HBcAg被HBsAg所覆蓋，血中不易檢出。由病毒DNA的CORF編碼。HBcAg免疫原性強(qiáng)，抗-HBc IgG在血清中持續(xù)時(shí)間長，抗-HBc IgM提示HBV處于復(fù)制狀態(tài)?！　?）HBeAg為可溶性蛋白質(zhì)，游離在血中，其消長與病毒體及DNA多聚酶的消長基本一致，故HBeAg已作為HBV復(fù)制及具有強(qiáng)感染

71、性的一個(gè)指標(biāo)。由病毒DNA的C ORF編碼。　?。?）抵抗力：對(duì)理化因素有較強(qiáng)抵抗力。60℃加熱10小時(shí)，98℃加熱1分鐘，以及乙醚、pH為2.4的酸性環(huán)境處理6小時(shí)均不能有效滅活病毒。</p><p>　　2.微生物檢驗(yàn)　　（1）標(biāo)本的采集與處理：臨床上常采集血液標(biāo)本，HBV的血清標(biāo)志物較穩(wěn)定?！　。?）檢查方法：臨床實(shí)驗(yàn)室目前主要靠RIA和ELISA等血清學(xué)方法檢測(cè)HBsAg、HBeAg、抗-HBs、抗

72、-HBc、抗-HBe。其中HBsAg的檢測(cè)最為重要，可發(fā)現(xiàn)無癥狀攜帶者，是獻(xiàn)血者篩選的必檢指標(biāo)。近年來，PCR檢測(cè)HBV DNA也用于乙型肝炎的臨床診斷。　　3.臨床意義 乙型肝炎病毒可致乙型肝炎。病毒是通過破損的皮膚和黏膜侵入機(jī)體，傳染源是HBV攜帶者和患者的血液、唾液、精液和陰道分泌物等。HBV的傳播途徑大致可分為血液、血制品傳播、性傳播、母嬰傳播?！　∫倚透窝着R床表現(xiàn)呈多樣性。在多數(shù)急性感染患者中，肝炎癥狀不明顯，既無癥狀，也

73、無黃疸。有一些患者有癥狀但無黃疸，還有一些患者既有黃疸又有癥狀。肝炎的癥狀可以是輕度而短暫的，也可以是重度和遷延性的?；颊呖梢酝耆謴?fù)健康。也可因暴發(fā)性肝炎而致死或成為慢性肝炎。部分HBV持續(xù)感染者可發(fā)生原發(fā)性肝癌。</p><p>　　（三）丙型肝炎病毒　　1.生物學(xué)性狀 丙型肝炎病毒（HCV）是小的有包膜的單正股RNA病毒，可感染黑猩猩并在體內(nèi)連續(xù)傳代，引起慢性肝炎。目前尚不能用體外細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行分離。世界各

74、地分離的HCV毒株可分為20余個(gè)基因型。其抗原成分主要包括核衣殼蛋白，包膜蛋白及非結(jié)構(gòu)蛋白。HCV對(duì)各種理化因素的抵抗力較弱，對(duì)酸、熱均不穩(wěn)定。沸水煮5分鐘或60℃加熱30分鐘均可使感染性喪失。對(duì)氯仿、乙醚等有機(jī)溶劑敏感。　　2.微生物檢驗(yàn) 目前臨床上常用的HCV檢測(cè)方法主要有兩類：血清學(xué)方法及PCR方法。血清學(xué)方法主要是以EIA測(cè)定抗-HCV。分子生物學(xué)方法檢測(cè)HCV RNA。HCV抗體檢測(cè)主要是ELISA法作為篩選試驗(yàn)，采用條帶免

75、疫法作確認(rèn)試驗(yàn)。　　3.臨床意義 HCV主要經(jīng)輸血或其他非腸道途徑（如共用針頭、血透析等）進(jìn)行傳播。但有近半數(shù)的HCV感染中，傳播途徑尚不清楚?！　CV的亞臨床感染，臨床上無自覺癥狀，而ALT不正常，是丙型肝炎的主要傳染源。丙型肝炎根據(jù)臨床病程可劃分為急性和慢性，以6個(gè)月為區(qū)分界限。HCV感染的一個(gè)主要特點(diǎn)就是慢性化的幾率很高，感染過程很長，存在不同程度的肝組織病變，并呈慢</p><p>　?。ㄋ模┒⌒透?/p>

76、炎病毒　　1.生物學(xué)特性 丁型肝炎病毒（HDV）為球形，外被HBsAg包繞，核心含HDV抗原（HDAg）和HDV-RNA基因組，基因組為一單負(fù)鏈環(huán)狀RNA。HDV不能獨(dú)立復(fù)制，需要HBV輔助才能增殖。對(duì)HDV敏感的動(dòng)物有黑猩猩、東方土撥鼠等?！　?.微生物檢驗(yàn) 通過檢測(cè)HDV感染的血清學(xué)標(biāo)志物以及HDV RNA，結(jié)合HBV感染的檢測(cè)，可作出HDV感染的實(shí)驗(yàn)室診斷?！　。?）HDAg檢測(cè)：將患者標(biāo)本，如肝組織或血清等，用去垢劑處理，

77、去除表面的HBsAg，然后用RIA或ELISA檢測(cè)HDAg?！　。?）HDV RNA檢測(cè)：可以利用核酸雜交或RT-PCR技術(shù)對(duì)HDV RNA進(jìn)行檢測(cè)?！　。?）抗-HDV抗體檢測(cè)：HDV感染后2周左右產(chǎn)生抗-HD IgM，一個(gè)月達(dá)高峰，隨后迅速下降，抗-HD IgG出現(xiàn)較遲，在恢復(fù)期出現(xiàn)。丁型肝炎抗體不能清除病毒，如持續(xù)高效價(jià)，可作為慢性丁肝的指標(biāo)。利用ELISA等方法檢測(cè)患者血清中抗-HDV IgM或抗-HDV IgG。通過檢測(cè)抗

78、-HBs IgM或IgG以及HBeAg和抗-HBe，作出同步感染和重疊感染的診斷。</p><p>　　3.臨床意義 HDV可引起與HBV相關(guān)聯(lián)的急性和慢性肝病。HDV感染通常引起嚴(yán)重和進(jìn)行性的肝病。HDV傳播方式主要是經(jīng)血傳播，也可通過密切接觸與母嬰間垂直傳播。HDV感染只有在感染了HBV的人群或是與HBV同時(shí)侵入才能發(fā)生。根據(jù)與HBV感染的關(guān)系，可將HDV感染分為兩種類型：同步感染指與HBV同時(shí)或者先后感染；

79、重疊感染指在慢性HBV感染的基礎(chǔ)上發(fā)生HDV感染。重疊感染極易導(dǎo)致慢性化。</p><p>　?。ㄎ澹┪煨透窝撞《尽　?.生物學(xué)特性 戊型肝炎病毒（HEV）為球形，無包膜，基因組為正單股RNA，體外培養(yǎng)不易獲得成功，敏感的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為靈長目。特別是獼猴和黑猩猩。HEV對(duì)高鹽、氯化銫、氯仿和反復(fù)凍融敏感?！　?.微生物檢驗(yàn) 可用電鏡或免疫電鏡技術(shù)檢測(cè)患者糞便中的HEV顆粒，也可用PCR方法檢測(cè)標(biāo)本中HEV RNA

80、，但臨床常用的診斷方法是檢測(cè)血清中的抗HEV IgM或IgG?！　?.臨床意義 HEV可引起戊型肝炎。HEV主要經(jīng)糞-口途徑傳播，患者多見于成人，未成年者大多為隱性感染。戊型肝炎的潛伏期約為10～60天，潛伏期末和急性期初的患者糞便中病毒量較大，傳染性最強(qiáng)，是戊型肝炎的主要傳染源。臨床表現(xiàn)以黃疸為主多數(shù)患者發(fā)病6周即可好轉(zhuǎn)并痊愈，不發(fā)展為慢性肝炎。</p><p>　　七、反轉(zhuǎn)錄病毒　　反轉(zhuǎn)錄病毒科的病毒因帶

81、有以RNA為模板合成DNA的反轉(zhuǎn)錄酶而得名。分為三個(gè)亞科七個(gè)屬?！　∪祟惷庖呷毕莶《救祟惷庖呷毕莶《荆℉IV）在病毒分類學(xué)上屬反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒亞科慢病毒屬。已發(fā)現(xiàn)有HIV-1和HIV-2兩型。HIV-1是引起全球艾滋病流行的病原體，HIV-2主要局限于西部非洲?！　?.生物學(xué)特性　?。?）形態(tài)結(jié)構(gòu)：病毒為RNA病毒，呈球形，核心含有RNA、反轉(zhuǎn)錄酶和核衣殼蛋白，外被脂蛋白包膜，其中鑲嵌有g(shù)p120和gp41兩種特異的糖蛋白。gP

82、120與CD4受體蛋白結(jié)合。gp41為跨膜蛋白?！　。?）基因組結(jié)構(gòu)：由兩條拷貝的單股正鏈RNA在5’端通過氫鍵結(jié)合而形成的二聚體?；蚪M從5’至3’端依次排列為LTR、gag、pol、env、LTR，還有6個(gè)調(diào)節(jié)基因，即tat、rev、nef、vif、vpr、vpu/vpx。gag基因編碼病毒的核心蛋白，其中衣殼蛋白p24特異性最強(qiáng)。pol基因編碼病毒復(fù)制所需的酶類。env基因編碼合成兩種包膜糖蛋白gp120和gp41。</p

83、><p>　　（3）病毒的復(fù)制：病毒包膜糖蛋白gP120與細(xì)胞上的CD4受體結(jié)合，病毒包膜與細(xì)胞膜發(fā)生融合。核衣殼進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)內(nèi)脫殼，釋放核心RNA。在病毒反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以RNA為模板進(jìn)行復(fù)制。子代RNA與一些合成的結(jié)構(gòu)蛋白裝配成核衣殼，從宿主細(xì)胞膜獲得包膜組成完整的有感染性的子代病毒，以出芽方式釋放到細(xì)胞外?！　。?）病毒受體與細(xì)胞親嗜性：HIV的主要靶細(xì)胞是CD4T淋巴細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞亞群。皮膚的Lang

84、erhans細(xì)胞、淋巴結(jié)濾泡的樹突狀細(xì)胞、腦小膠質(zhì)細(xì)胞等也是感染的對(duì)象。CD4分子是HIV的主要受體，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)兩種輔助受體CXCR4和CCR5。前者是HIV的親T細(xì)胞病毒株的輔助受體，后者是HIV的親巨噬細(xì)胞病毒株的輔助受體?！　。?）培養(yǎng)特性：HIV感染的宿主范圍和細(xì)胞范圍較窄。在體外僅感染表面有CD4受體的T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)室常用新鮮分離的正常人T細(xì)胞或患者自身分離的T細(xì)胞培養(yǎng)病毒?！　。?）抵抗力：病毒抵抗力較弱，56℃3

85、0分鐘可滅活。可被消毒劑滅活。但在室溫病毒活性可保持7天。</p><p>　　2.微生物檢查 HIV感染的標(biāo)志可分為病毒標(biāo)志、免疫標(biāo)志和相關(guān)標(biāo)志?！　。?）病毒標(biāo)志是指病毒培養(yǎng)或用分子生物學(xué)方法直接從感染者體內(nèi)分離HIV或其基因物質(zhì)。　?。?）免疫標(biāo)志是指HIV抗原及抗體等免疫復(fù)合物?！　?）抗原檢測(cè)：常用間接ELISA法檢測(cè)P24抗原?！　?）抗體檢測(cè)：抗核心蛋白p24及其前體P55的抗體在血清中出現(xiàn)

86、最早，隨后出現(xiàn)抗包膜糖蛋白gp120/160的抗體。這些被認(rèn)為是初期感染的最穩(wěn)定的指標(biāo)?？固堑鞍譖41的抗體常在P24抗體出現(xiàn)后數(shù)周才出現(xiàn)?！　、俪鹾Y試驗(yàn)酶免法（EIA）、免疫熒光法（IFA）、凝集試驗(yàn)等?！　、诖_證試驗(yàn)免疫印跡試驗(yàn)（Western bolt，WB）、放射免疫沉淀試驗(yàn)?！　?）相關(guān)標(biāo)志：是指與艾滋病病情發(fā)展或HIV感染密切相關(guān)而存在于體內(nèi)的某些生化或化學(xué)物質(zhì)。如CD4細(xì)胞、新蝶呤、白細(xì)胞介素等。</p>

87、<p>　　3.臨床意義 HIV是獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS，艾滋病）的病原體。AIDS是以侵犯CD4細(xì)胞為主，造成細(xì)胞免疫功能缺陷，并繼發(fā)體液免疫功能缺損為基本特征的傳染病。其傳染源是HIV無癥狀攜帶者和艾滋病患者。傳播途徑主要有：性接觸傳播、血液傳播、母嬰傳播?！　腍IV感染到發(fā)展為典型AIDS分為4個(gè)時(shí)期，即急性感染期、無癥狀感染期、艾滋病相關(guān)綜合征、艾滋?。ò滩⊥耆停??！　IV的致病機(jī)制主要有以下幾

88、種觀點(diǎn)：HIV直接損傷或間接損傷CD4T細(xì)胞；HIV抑制抗原遞呈細(xì)胞功能；HIV誘發(fā)自身免疫性疾病及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；HIV導(dǎo)致CD8T細(xì)胞喪失抗病毒活性等。　　機(jī)體感染HIV后可產(chǎn)生多種抗體，病毒也可刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答，但依然無法清除病毒，這與病毒能逃逸免疫作用有關(guān)。</p><p>　　八、狂犬病病毒　　（一）生物學(xué)性狀 狂犬病病毒外形似子彈狀，病毒體內(nèi)含單負(fù)股RNA，外面是脂蛋白包膜，其表面有許多糖蛋

89、白刺突，與病毒的感染性和毒力有關(guān)。是一種嗜神經(jīng)性病毒。該病毒可感染的動(dòng)物范圍較廣。在易感動(dòng)物或人類的中樞神經(jīng)細(xì)胞中增殖時(shí)，在胞質(zhì)內(nèi)形成嗜酸性包涵體，稱內(nèi)基小體，在診斷上很有價(jià)值。</p><p>　?。ǘ┪⑸餀z驗(yàn)　　1.隔離觀察動(dòng)物 人類被犬和其他動(dòng)物咬傷后，將該動(dòng)物隔離觀察，若7～10天不發(fā)病，一般認(rèn)為該動(dòng)物沒有患狂犬病或咬人時(shí)唾液中尚無狂犬病病毒?！　?.印片、切片檢查 若以上隔離動(dòng)物在觀察期間發(fā)病，

90、即將其殺死，取海馬回部組織作切片或涂片，用HE染色檢查內(nèi)基小體或用直接熒光抗體法（DFA）檢測(cè)病毒抗原，或用ELISA法查抗原。　　3.細(xì)胞培養(yǎng) 將感染的動(dòng)物或人類的相應(yīng)組織懸液接種敏感細(xì)胞，培養(yǎng)40～48小時(shí)后，用DFA進(jìn)行病毒抗原檢測(cè)，如果陰性進(jìn)行第二代培養(yǎng)，經(jīng)3～4天，再用DFA檢查是否有病毒生長，如果二次培養(yǎng)均陰性，則最終視為陰性?！　?.血清學(xué)診斷 常用方法有中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)、ELISA試驗(yàn)等方法。　

91、　5.分子生物學(xué) 可以利用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)標(biāo)本中狂犬病毒RNA，此方法敏感、快速、特異。　　（三）臨床意義 狂犬病病毒可引起人類狂犬病，人類狂犬病大多數(shù)是由病犬咬傷所致，有時(shí)也可因貓、狼以及其他帶病毒動(dòng)物咬傷所致。人類發(fā)病時(shí)的典型表現(xiàn)是神經(jīng)興奮性增高，吞咽或飲水時(shí)喉頭肌痙攣，甚至聞水聲或其他輕微刺激包括光線均可引起全身痙攣發(fā)作，又稱恐水</p><p>　　九、人乳頭瘤病毒　　（一）生物學(xué)性狀 人乳頭瘤病

92、毒由病毒衣殼和雙鏈環(huán)狀DNA組成。具有宿主和組織特異性，只能感染人的皮膚、黏膜的上皮細(xì)胞，在易感細(xì)胞核內(nèi)增殖形成核內(nèi)嗜酸性包涵體。目前HPV組織培養(yǎng)尚未成功?！　。ǘ┪⑸餀z驗(yàn) 臨床常根據(jù)病史及典型的臨床表現(xiàn)即可作出診斷。癥狀不典型的可作病理學(xué)檢查或用免疫組化技術(shù)等方法檢查病變組織中的HPV抗原。目前常用的分子生物學(xué)診斷方法有：核酸分析、原位雜交、DNA印跡、PCR?！　。ㄈ┡R床意義 HPV可通過性接觸感染，引起尖銳濕疣。嬰幼兒

93、可在分娩過程中感染，或與母親密切接觸而感染。病毒感染僅局限于局部皮膚和黏膜中，引起該部位多種疣，不產(chǎn)生病毒血癥。不同型的HPV侵犯的部位和所致疾病不盡相同。尖銳濕疣主要由HPV-6引起，也可由1、2等型引起。HPV-16、18、31、33等型別可引起宮頸內(nèi)瘤樣變，組織學(xué)變化可由宮頸上皮的不典型增生至原位癌，嚴(yán)重者可發(fā)展為浸潤癌。</p><p>　　十、朊?！　‰貌《揪褪堑鞍踪|(zhì)病毒，是只有蛋白質(zhì)而沒有核酸的病毒