豬脂蛋白脂酶（LPL）和激素敏感脂肪酶（HSL）基因的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)研究.pdf

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文豬脂蛋白脂酶（LPL）和激素敏感脂肪酶（HSL）基因的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)研究姓名：雷明剛申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：鄧昌彥;熊遠(yuǎn)著20031101豬H S L 基因編碼序列，片段長度未2 5 6 0 b p 。梅山、大白、長白豬三品種豬H S L 基因c D N A序列比較結(jié)果顯示，5 ’—- U T R ，E x o n1 、2 、3 、4 、5 、6 、7 、8 、9 的堿基變異數(shù)分別是1

2、 、4 、0 、0 、2 、l 、3 、0 、4 、3 。但D N A 水平上測定梅山豬、清平豬、杜洛克豬、大白豬H S L 基因5 ’—_ U T R 共5 0 0 b p 長度序列時，沒有檢1 壩4 到H a r b i t z 等( 1 9 9 9 ) 報道的．1 3 ~ - 1 2 b p 位置G C 和C G 問的堿基變異。在D N A 水平上，選擇梅山豬( 3 樣本) 、通城豬( 3 樣本) 、大白豬( 3 樣本) 、長白豬

3、( 3 樣本) 4 個不同品種豬，測定H S L 基因E x o n l 、4 、5 、8 序列時，只在E x o n l ( A —G ) 、E x o n 8 ( T —G ) 各自檢測到一個堿基變異。預(yù)測氨基酸結(jié)果顯示，這兩處堿基變異均引起了編碼氨基酸變化，而且二者在梅山豬、通城豬和大白豬、長白豬之間表現(xiàn)出明顯的品種特征。結(jié)合吳楨方( 1 9 9 8 ) 的研究結(jié)果，比較分析發(fā)現(xiàn)E x o n 8 中G 堿基座位是豬背膘厚向下選擇

4、的有利等位基因。5 、采用P C R - R F L P 方法，研究了大白豬、長白豬、通城豬、清平豬、杜洛克豬和“大白×梅山”F 2 群體共3 8 5 個個體H S L - E x o n lB s a H I 位點的多態(tài)性。大白豬和長白豬為單一的G G 基因型：杜洛克豬表現(xiàn)為A G 和G O 兩種基因型，有更多的等位基因G ；通城豬和清平豬均表現(xiàn)為A A 和A G 兩種基因型，有更多的等位基因A 。大白豬、長白豬、通城豬、清

5、平豬、杜洛克豬、F 2 群體檢出的A 、G 等位基因頻率分別是：0 、1 0 0 ％：0 、1 0 0 ％, 9 1 ．7 ％、8 _ 3 ％：8 9 _ 3 ％、1 0 ．7 ％；1 5 ％、8 5 ％：4 5 ．2 ％、5 4 ．8 ％。對“大白×梅山”F 2群體不同基因型對應(yīng)的性狀值進(jìn)行協(xié)方差統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)A G 基因型和G O 基因型眼肌面積存在顯著差異( P < 5 ％) 。不同基因型的其它性狀沒有顯著差異。6

6、 、應(yīng)用P C R 產(chǎn)物直接測序和P C R ．R F L P 的方法，發(fā)現(xiàn)了L P L 基因的5 ’—_ U T R 區(qū)段- 7 b p M ／uI 位點的多態(tài)性。但品種間檢測到的等位基因M 和m 的基因頻率差異不大，而且所有被檢測的品種，包括F 2 群體，m 等位基因頻率均超過9 0 ％。7 、發(fā)現(xiàn)L P L 基因I n t r o n 6S m aI 位點P C R - R F L P 多態(tài)性，并建立了相應(yīng)的檢測方法。分析了不同基

7、因型在長白豬、大白豬、清平豬、杜洛克豬、通城豬和1 3 3 頭“大白×梅山”資源家系F 2 代個體中的分布，各自檢測到的T 、t 等位基因頻率分別是6 4 ．4 7 ％、3 5 ．5 3 ％；2 1 ．4 3 ％、7 8 ．5 7 ％；5 2 ．2 7 ％、4 7 ．7 3 ％；O ．0 0 ％、1 0 0 ．0 0 ％；4 4 ．7 4 ％、5 5 ．2 6 ％：4 8 ．1 2 ％、5 1 ．8 8 ％。對“大自×

8、;梅山”F 2 群體不同基因型對應(yīng)的性狀值進(jìn)行協(xié)方差統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)T T基因型和t t 基因型的平均背膘厚有顯著差異( P < 5 ％) 。不同基因型的其它性狀沒有顯著差異。8 、選擇p T W I N l 原核表達(dá)載體，構(gòu)建了豬L P L ．p T W I N l 、H S L ．p T W I N l 重組質(zhì)粒，限制性酶切鑒定正確。用I P T G 進(jìn)行重組質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá)，L P L ．p T W I N I 獲得了與預(yù)期結(jié)果