全身低氧預(yù)處理對腦梗塞大鼠腦內(nèi)GFAP和NEUN表達的影響.pdf

1、目的:
　　 缺血性腦血管病仍是現(xiàn)代社會影響人類健康的最主要的疾病之一，其死亡率高、致殘率高。腦缺氧缺血預(yù)處理被認為是一種最強的神經(jīng)內(nèi)源性保護現(xiàn)象，但由于其是損傷性預(yù)適應(yīng)，局部的缺血預(yù)處理多是在重要器官（如腦、心臟等）進行操作，有誘發(fā)心肌梗死和中風的危險，其在臨床引用仍然有很大的限制。
　　 全身低氧預(yù)處理(whole body hypoxic preconditioning，WHPC)是預(yù)處理應(yīng)用中的一項突破，研究證實

2、，其同樣具有器官保護作用。且對局部器官的損傷更小，不需為提前的反復(fù)短暫的器官缺血而進行手術(shù)，不易引起感染，且低氧濃度和時間可以調(diào)節(jié)，可控性好。但是在實施WHPC的過程中會對人體血流動力學造成嚴重影響，清醒狀態(tài)難以耐受。所以在麻醉狀態(tài)下應(yīng)用WHPC成為必然。
　　 星形膠質(zhì)細胞(astrocyte，AST)參與細胞骨架的組成，在神經(jīng)發(fā)育中可引導(dǎo)神經(jīng)元遷移，促進神經(jīng)元存活與分化，對神經(jīng)元具有支持、營養(yǎng)的作用，分泌多種神經(jīng)營養(yǎng)因子和生

3、長因子，同時還具有參與調(diào)節(jié)細胞內(nèi)外離子平衡，與周圍神經(jīng)元建立廣泛的連接。近年來大量的研究證明，在病理損傷的狀態(tài)下，AST可以反復(fù)的增生、活化，早期可以保護神經(jīng)元，促進其修復(fù)再生，但晚期由于膠質(zhì)細胞活化造成瘢痕增生，反而不利于神經(jīng)元的修復(fù)，甚至可造成神經(jīng)元進一步損傷。GFAP是星形膠質(zhì)細胞中最主要的中間絲蛋白，是AST的發(fā)育過程中細胞骨架的重要組成部分。GFAP表達的強弱可以反映星形膠質(zhì)細胞的功能狀態(tài)，是被公認為星形膠質(zhì)細胞的特征性標記物

4、。
　　 本研究擬探討將全身低氧預(yù)處理和目前臨床上應(yīng)用最廣泛的靜脈麻醉藥物之一異丙酚聯(lián)合應(yīng)用，觀察其對局灶性腦缺血再灌注大鼠星形膠質(zhì)細胞的影響。我們通過異丙酚聯(lián)合低氧預(yù)處理后，制備大鼠局灶性腦缺血再灌住損傷模型，檢測腦組織不同區(qū)域GFAP表達的變化，為異丙酚聯(lián)合低氧預(yù)處理治療缺血性腦血管疾病提供新的依據(jù)。
　　 方法:
　　 1、動物選擇及分組選擇健康成年SD雄性大鼠130只，體重180g～250g，隨機分為缺血

5、再灌注損傷組（IR組，n=40）;全身低氧預(yù)處理組（WHPC組，n=40）;異丙酚聯(lián)合全身低氧預(yù)處理組（WHPC+P組，n=40）;無梗塞組(Sham組，n=10)。
　　 2、模型評價分別在缺血兩小時再灌注1、3、7、14、21d不同的時間點進行大鼠行為學評分;HE染色觀察梗死中心和半暗帶神經(jīng)細胞的病理改變。
　　 3、低氧預(yù)處理自制常壓有機玻璃低氧箱，大小100cm*80cm*60cm。設(shè)進氣口，出氣口，氣體濃度檢測

6、口，箱體兩側(cè)裝有小型風扇，混勻箱內(nèi)氣體。每次最多放入5只大鼠，進氣口出通入氮氣，當箱內(nèi)的氧濃度降為8％時，開始計時。3h后打開低氧箱，將大鼠放回鼠舍，自由飲食、飲水。24h后制備大鼠MCAO模型。
　　 4、局灶性腦缺血再灌注大鼠損傷模型的制備采用ZeaLonga法制備大鼠局灶性腦缺血(middle cerebral artery occlusion MCAO)2h再灌注損傷的模型。假手術(shù)組僅分離頸內(nèi)外動脈并結(jié)扎，但不插線。

7、r>　　 5、GFAP、NEUN蛋白檢測 IR組;WHPC組;WHPC+P組;Sham組，在缺血2h再灌注后1d，3d，7d，14d，21d分別取腦，利用免疫組化技術(shù)測定腦組織GFAP/NEUN的表達。
　　 6、學習記憶能力檢測雄性SD大鼠，隨機分為IR組;WHPC組;WHPC+P組;Sham組，各組大鼠在造模后7d、14d、21d取材前5d進行Morris水迷宮試驗，分別進行巡航定位試驗4d和隨后的空間探索試驗1d。分別記

8、錄各組大鼠各時間點巡航定位試驗的逃避潛伏期、空間探索試驗中穿越平臺的次數(shù)。
　　 結(jié)果:
　　 1、各實驗組和對照組大鼠的性別、鼠齡、體重差別無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 2、免疫組化結(jié)果顯示造模成功后1d、3d，IR組、WHPC組、WHPC+P組梗死中心GFAP的表達量與sham組相比增多，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。與IR組相比，WHPC組、WHPC+P組表達量增加(P＜0.05)，但后兩者之

9、間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。造模成功后7d、14d，各組梗死中心GFAP的表達量較sham組明顯減少(P＜0.05)，但各組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 3、IR組、WHPC組、WHPC+P組造模成功后各相應(yīng)時間點邊緣帶GFAP表達量較sham組明顯增加(P＜0.05);WHPC組、WHPC+P組在造模后1d、3d、7d GFAP表達量相對于IR組增多(P＜0.05);造模后3d，WHPC組、WHPC+P組

10、GFAP的表達量達高峰，IR組在造模后7d達高峰，WHPC組、WHPC+P組GFAP表達量相對于IR組表達高峰提前;WHPC組較WHPC+P組表達量增加，但差異沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 4、在梗死中心和缺血半暗帶IR組、WHPC組、WHPC+P組NEUN表達與sham組相比明顯減少(P＜0.05);WHPC組、WHPC+P組各相應(yīng)時間點NEUN表達量較IR組明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)
　　

11、 5、IR組、WHPC組、P+WHPC組相對于sham組Morrs水迷宮中逃避潛伏期增加(P＜0.05); WHPC組、P+WHPC組逃避潛伏期較IR組縮短(P＜0.05)。WHPC組、P+WHPC組穿越平臺次數(shù)較IR組增加(P＜0.05)，WHPC組、P+WHPC組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、全身低氧預(yù)處理可以激活膠質(zhì)細胞增生活化，使GFAP表達量增高，表達高峰提前。從而在缺血早期保