胚胎及新生大鼠腦組織Nestin NSE GFAP表達(dá)的改變.pdf

1、目的:研究不同發(fā)育期腦組織Nestin、NSE、GFAP的相對數(shù)量及空間分布狀況,探討腦的神經(jīng)發(fā)育規(guī)律,為后期研究選擇恰當(dāng)發(fā)育期的實驗動物,確定取材部位,分離富集和增殖均質(zhì)的神經(jīng)干細(xì)胞,神經(jīng)干細(xì)胞定向分化及移植治療,建立大鼠胚胎發(fā)育期與人類胚胎發(fā)育階段之間的對應(yīng)關(guān)系等研究工作提供實驗依據(jù).方法:將Wistar大鼠按胎齡與日齡分組,將整腦取出.一方面,經(jīng)固定、包埋、制備不同腦平面的石蠟切片,用SABC免疫組化染色法檢測不同發(fā)育期Nesti

2、n、NSE、GFAP的空間分布;另一方面,制備單細(xì)胞懸液,經(jīng)間接免疫熒光標(biāo)記Nestin、NSE、GFAP抗原,用流式細(xì)胞術(shù)檢測其熒光表達(dá)的百分?jǐn)?shù),并進(jìn)行分析.結(jié)果:1.從E12至P9整個研究階段均有Nestin表達(dá),出生前顯著高于出生后;表達(dá)具波動性,E12表達(dá)最高,E16至E18出現(xiàn)第二個表達(dá)高峰.E12可見神經(jīng)嵴大量Nestin陽性細(xì)胞散在分布于神經(jīng)管和外胚層之間.E16已可見Nestin陽性表達(dá)細(xì)胞分布于局限區(qū)域.2.NSE于E

3、14開始有明顯表達(dá),始見于網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)區(qū)域,尚未形成神經(jīng)核團(tuán)結(jié)構(gòu).于E16,網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)區(qū)域NSE分布局限,聚集成團(tuán).E16可見NSE存在于皮層下折疊中;P3表達(dá)出現(xiàn)最高峰.3.GFAP于E12有少量表達(dá),于E16開始明顯表達(dá)并逐漸升高,逐漸穩(wěn)定于成鼠的表達(dá)量.結(jié)論:1.腦神經(jīng)干細(xì)胞表達(dá)Nestin始于胚胎發(fā)育早期,整個研究階段表達(dá)水平具有波動性,出生前明顯高于出生后.E12期及E16至E18期出現(xiàn)兩個表達(dá)高峰,出生后表達(dá)水平顯著下降,P9已近