IL-27對U937細胞的生物學(xué)行為的影響.pdf

1、白細胞介素-27(interleukine27，IL-27)是2002年發(fā)現(xiàn)并命名的一種新的細胞因子，它與IL-12以及另一種新發(fā)現(xiàn)的細胞因子IL-23共同組成IL-12分子家族，具有復(fù)雜的生物學(xué)功能，在抗感染免疫、抗腫瘤免疫、自身免疫病中發(fā)揮著重要的作用。
　　 IL-27作為IL-12家族的成員，其抗腫瘤作用一直是廣大學(xué)者關(guān)注的焦點。研究發(fā)現(xiàn)IL-27可以通過許多不同的機制發(fā)揮抗腫瘤作用，包括CD8+T細胞的特異性殺傷、誘導(dǎo)

2、機體細胞分泌IFN-γ、抑制血管生成、活化NK細胞；最近有研究證實，IL-27可以不依賴免疫細胞發(fā)揮直接的抗腫瘤作用，這些實驗證據(jù)都提示了IL-27可以作為一種新的有效的抗腫瘤藥物。
　　 目前，IL-27的抗腫瘤作用的研究主要是在實體瘤方面。而IL-27對血液學(xué)腫瘤的作用機制尚不清楚。我們前期的實驗研究發(fā)現(xiàn)，IL-27受體WSX-1和gp130在AML尤其在AML-M5(急性單核細胞白血病)病人高表達，用人急性單核細胞白血病細

3、胞株U937為研究對象，我們發(fā)現(xiàn)rhIL-27能夠誘導(dǎo)U937細胞產(chǎn)生抗腫瘤性細胞因子TNF-α和IL-12，抑制U937細胞增殖并誘導(dǎo)細胞凋亡。本研究就是在前期實驗的基礎(chǔ)上進一步探討IL-27的抗腫瘤作用機制。
　　 研究目的：
　　 一、了解rhIL-27對U937細胞增殖的影響；
　　 二、檢測rhIL-27對U937細胞中促凋亡基因bax、p53的mRNA水平表達的影響；及對U937細胞中凋亡相關(guān)蛋白ca

4、spase3的表達和活性的影響；
　　 三、檢測rhIL-27對U937細胞中的MHCⅠ類分子，協(xié)同刺激分子CD86和黏附分子CD54表達的影響；
　　 實驗方法：
　　 一、MTT比色法測定細胞的增殖抑制率；
　　 二、以不同濃度的rhIL-27刺激U937細胞，TRIzol法提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，分別采用熒光定量PCR，RT-PCR測定caspase3，Bax，P53的mRNA表達水平；cas

5、pase3活性試劑盒測定casp3的活性，
　　 三、熒光定量PCR法測定MHCⅠ類分子(HLA-A，HLA-B，HLA-C，)及β2微球蛋白和CD86，CD54的表達，流式細胞檢測CD86，CD54在細胞表面的表達。
　　 實驗結(jié)果：
　　 一、MTT實驗結(jié)果表明，rhIL-27能顯著影響U937細胞的增殖(以阿糖胞苷為陽性對照)，并且可以和阿糖胞苷產(chǎn)生協(xié)同的增殖抑制作用；
　　 二、PCR及熒光定量P

6、CR結(jié)果顯示：rhIL-27可以顯著誘導(dǎo)U937細胞中促凋亡基因Bax、P53的表達(P＜0.01)，并呈現(xiàn)劑量相關(guān)性，在劑量較小的時候隨著rhIL-27濃度的增加而增加，濃度為40ng/ml時，作用最大；rhIL-27還可以誘導(dǎo)U937細胞中凋亡相關(guān)蛋白caspase3 mRNA水平的表達，增加caspase3的活性，與rhIL-27濃度及處理時間有關(guān)，濃度為40ng/ml，作用48小時達到最大，實驗組與對照組相比具有顯著性差異(P＜

7、0.05)；
　　 三、rhIL-27可以誘導(dǎo)U937細胞中MHCⅠ類分子(HLA-A、B、C)、β2微球蛋白、協(xié)同刺激分子CD86及CD54的表達，在rhIL-27濃度為40mg/ml時，作用達到最大；
　　 結(jié)論：
　　 1.rhIL-27直接抑制U937細胞的增殖，還可以和阿糖胞苷產(chǎn)生協(xié)同的U937細胞增殖抑作用；
　　 2.rhIL-27可以誘導(dǎo)U937細胞促凋亡基因Bax、p53的mRNA水平的

8、表達增加，從而誘導(dǎo)腫瘤細胞中凋亡通路的激活，提示：U937細胞的增殖抑制可能是由于凋亡途徑的激活所致；凋亡下游信號蛋白caspase3表達和活性的測定，進一步證實rhIL-27可以誘導(dǎo)U937細胞凋亡，產(chǎn)生增殖抑制。
　　 3.rhIL-27可以誘導(dǎo)U937細胞中提呈內(nèi)源性抗原的MHCⅠ類分子的表達，增加了腫瘤細胞對CTL的敏感性；rhIL-27可以誘導(dǎo)U937細胞表面的CD86、CD54的表達，為CTL和腫瘤細胞的識別提供協(xié)同