小腸腺癌微衛(wèi)星不穩(wěn)定性、抑癌基因和相關(guān)突變的研究.pdf

1、第一部分小腸腺癌的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性研究 目的通過PeR-SSCP方法對(duì)40例小腸腺癌的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatellite instability,MSI)進(jìn)行檢測，探討MSI在小腸腺癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中的作用及意義，為臨床腫瘤的診斷及治療提供依據(jù)。方法以結(jié)直腸癌檢測中具有較高突變率的5個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)BAT26、BAT40、D2S123、D17S250和D5S346為檢測位點(diǎn)。收集的小腸腺癌病理標(biāo)本癌組織面積大于切片面積70

2、％為入選蠟塊，癌旁正常組織為對(duì)照。利用酚一氯仿法提取組織DNA，分析標(biāo)本DNA含量并剔除DNA含量低的標(biāo)本。應(yīng)用PCR-SSCP法分析小腸腺癌5個(gè)位點(diǎn)的MSI。結(jié)果40例小腸腺癌中14例表現(xiàn)為1個(gè)或以上位點(diǎn)的不穩(wěn)定性，MSI發(fā)生率為35.0％。其中8例表現(xiàn)為2個(gè)以上位點(diǎn)的不穩(wěn)定性，MSI-H為20.0％；6例表現(xiàn)為1個(gè)位點(diǎn)的不穩(wěn)定性，MSI—L為1 5％；其余26例微衛(wèi)星穩(wěn)定(MSS)。所有40例患者中，5個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)共檢出有27個(gè)不穩(wěn)

3、定位點(diǎn)，其中BAT26的出現(xiàn)頻率為20.0％(8／40)，D2S123的出現(xiàn)頻率為22.5％(9／40)，明顯高于其他三個(gè)位點(diǎn)。應(yīng)用這2個(gè)標(biāo)記可使8例高M(jìn)SI中的5例獲得確認(rèn)，在6例低MSI中的5例獲得確認(rèn)。MSI-H小腸腺癌與MSI-L及MSS小腸腺癌組相比具有年齡偏輕、女性多見、細(xì)胞分化程度較好及十二指腸癌多見的特點(diǎn)。結(jié)論微衛(wèi)星不穩(wěn)定性可能是小腸腺癌發(fā)生中的一個(gè)重要原因。在5個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)中，BAT26和D2S123是確定小腸腺癌MS

4、I的較敏感的微衛(wèi)星位點(diǎn)。MSI—H小腸腺癌具有與MSS腫瘤不同的臨床和病理聯(lián)系。 第二部分小腸腺癌抑癌基因APC／MOC、DCC雜合性缺失和P53突變的研究 目的評(píng)估腫瘤抑制基因APC／MCC和DCC及P53在小腸腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，探討腫瘤抑制基因與微衛(wèi)星不穩(wěn)定性在小腸腺癌發(fā)生中的關(guān)系。方法采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)一限制性片段長度多態(tài)現(xiàn)象 (RFLP)分析和PCR—SSCP方法對(duì)40例小腸腺癌的APC／MCC、

5、DCC基因的雜合性缺失和P53基因突變進(jìn)行研究。結(jié)果對(duì)40例小腸腺癌APC／MCC和DCC的雜合性缺失(Loss of heterozygosity，LOH)的研究發(fā)現(xiàn)，APC的LOH在小腸腺癌中的發(fā)生率為5.0％(2／40)，其中在12例十二指腸腺癌中均未發(fā)現(xiàn)(0／12)，在空腸和回腸腺癌各一例，占11.1％(2／18)，MCC基因的LOH在40例小腸腺癌中亦未發(fā)現(xiàn)，DCC在本組中的LOH發(fā)現(xiàn)2例(2／40，5.0％)，2例LOH出現(xiàn)

6、在MSI—L(1／6，16.7％)和MSS(1／22，4.5％)中，MSI—H中無一例。40例小腸腺癌中，13例檢出P53突變(突變率32.5％)，在MSI—H組中有1例突變(突變率12.5％)，在MSS組中有12例，突變率為46.2％(12／26)，兩組具有顯著性差異(P<0.05)。結(jié)論抑癌基因APC／MCC和DCC的改變與其在結(jié)直腸癌和胃癌中不同，它們與小腸腺癌的發(fā)生可能沒有密切的聯(lián)系。MSI與APC／MCC和DCC的LOH負(fù)相關(guān)

7、性關(guān)系因?yàn)闃颖据^小尚無法使我們確定是否象在結(jié)直腸癌及胃癌中發(fā)現(xiàn)的那樣，在小腸腺癌的發(fā)病機(jī)理中也存在兩條不同的基因病理途徑，P53研究提示在小腸腺癌的發(fā)生中，P53的突變是一個(gè)頻發(fā)的現(xiàn)象，P53突變與MSI有負(fù)相關(guān)性，其在小腸腺癌的發(fā)生發(fā)展中可能具有重要的作用。 第三部分小腸腺癌微衛(wèi)星不穩(wěn)定性相關(guān)突變的研究 目的探討小腸腺癌微衛(wèi)星不穩(wěn)定性相關(guān)基因hMLHl，hMSH2，IGFIIR，TGF-β RII的突變及其在MSI中

8、的作用及意義。方法應(yīng)用PCR-SSCP方法對(duì)40例小腸腺癌的hMLHl、hMSH2、IGFIIR和TGF．β RII基因的突變情況進(jìn)行檢測。結(jié)果40例小腸腺癌中，26例MSS中未發(fā)現(xiàn)有hMLHl及hMSH2的改變。在8例MSI-H中5例(62.5％)突變，其中hMLHl 4例，hMSH2 l例；在6例MSI-L中1例hMLHl突變。在8例MSI-H中，發(fā)現(xiàn)TGF.β R II的基因突變率為50.0％(4/8)，IGFIIR基因突變率37

9、.5％(3/8)，而在MSI-L及MSS組未發(fā)現(xiàn)。MSI-H組TGF-β RⅡ和IGFIIR基因的突變與MSI-L及MSS組有顯著性差異(P<0.01)。結(jié)論小腸腺癌類似于其他胃腸道腫瘤，在小腸腺癌的發(fā)生中hMLHl的失活可能是MMR缺陷及導(dǎo)致MSI的主要機(jī)制。而hMSH2突變是稀少的，但hMSH2可能對(duì)小腸腺癌的進(jìn)一步分型有一定的意義。聯(lián)合分析MSI和hMLHl及hMSH2的突變可能是一個(gè)有價(jià)值的診斷手段。TGF-β R Ⅱ和IGFI