放射上調(diào)胸腺嘧啶磷酸化酶使人胰腺癌細(xì)胞化療增敏.pdf

1、研究目的：建立人胰腺癌細(xì)胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐藥株；觀察不同放射劑量照射后，耐藥株和親株中胸腺嘧啶磷酸化酶的表達(dá)情況；證實(shí)低劑量放射可上調(diào)胸腺嘧啶磷酸化酶的表達(dá)，且使序貫的5-FU對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生更強(qiáng)的生長(zhǎng)抑制作用。 研究方法：在體外，反復(fù)用5-FU處理AsPC-1后使其獲得耐藥性。給予耐藥株AsPC-15Fures和其親株不同的放射劑量和/或5-FU干預(yù)，利用Wst-1方法檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況。為了證明胸腺嘧啶磷酸化酶的表達(dá)

2、增加可使胰腺癌細(xì)胞化療增敏，借助蛋白印跡法觀察，放射后不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞內(nèi)胸腺嘧啶磷酸化酶的表達(dá)變化；將TPsiRNA轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞，檢測(cè)在相同的放射、5-FU或聯(lián)合序貫干預(yù)后的變化。 結(jié)果：經(jīng)5-Fu周期性誘導(dǎo)可獲得5-Fu耐藥株，AsPC-1和AsPC5-Fures的5-FUIC50，分別為157.138μM和1173.989μM，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；AsPC4—Fures還具有放射交叉耐受性。與2Gy相比，單獨(dú)的0.05Gy放射僅

3、輕度抑制5-FU耐藥株的生長(zhǎng)；給予0.05Gy與5-FU序貫處理后，增強(qiáng)了對(duì)5-FU耐藥株的生長(zhǎng)抑制作用，0.05Gy聯(lián)合5-FU組較于單獨(dú)應(yīng)用5-Fu組，AsPC5-Fures的抑制率提高了23.94％；而在2Gy聯(lián)合5-Fu組，抑制率上升了32.62％；與對(duì)照組比較，兩者的p＜0.001。蛋白印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，上述的增敏現(xiàn)象與胸腺嘧啶磷酸化酶的時(shí)間依賴性上調(diào)表達(dá)有關(guān)；借助RNA干擾技術(shù)，將人胰腺癌細(xì)胞中胸腺嘧啶磷酸化酶的表達(dá)關(guān)閉，這

4、種增敏現(xiàn)象隨即消失。 結(jié)論：通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)：0.05Gy，2Gy可以上調(diào)AsPC-1及其5-FU耐藥株的TP表達(dá)水平，且在耐藥株中更為明顯；通過(guò)上調(diào)TP的表達(dá)，低劑量照射0.05Gy與2Gy一樣，可促進(jìn)5-FU對(duì)胰腺腫瘤細(xì)胞的殺傷；低劑量照射0.05Gy與常規(guī)劑量2Gy一樣，可以抑制胰腺腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)；AsPC-1株的5-FU耐藥性與大劑量放射耐受性有交叉耐受現(xiàn)象。 人胰腺腺癌5-FU耐藥細(xì)胞株可經(jīng)低劑量放射獲得