腺相關(guān)病毒介導(dǎo)BMP-7和SOX9雙基因共同轉(zhuǎn)染兔退變椎間盤體內(nèi)試驗(yàn)研究.pdf

1、目的:建立兔椎間盤退變模型;應(yīng)用腺相關(guān)病毒(adeno-associated virus)介導(dǎo)BMP-7(human bone morphogenetie protein7)和SOX9雙基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔退變椎間盤，觀察單基因及雙基因聯(lián)合轉(zhuǎn)染對(duì)退變椎間盤的生物學(xué)效應(yīng)。
　　 方法:選取30只成年新西蘭大白兔，雌雄不限，重量約3kg，1歲齡，用20G針頭針刺L3、4、L4、5、L5、6椎間盤，制備椎間盤退變動(dòng)物模型。4周后將30只兔子

2、隨機(jī)分成5組:A、B、C、D、E組分別于造模髓核中注射AAV-BMP-7-Sox9、AAV-BMP-7、AAV-Sox9、AAV-EGFP，磷酸鹽緩沖液PBS。分別于二次手術(shù)后3、6、9周，采用計(jì)算機(jī)X線攝影術(shù)(Computed Radiography，CR)和Western blot技術(shù)，觀察對(duì)椎間盤退變的修復(fù)效果并檢測(cè)Ⅱ型膠原基因表達(dá)及蛋白多糖的合成。
　　 結(jié)果:針刺損傷椎間盤4周后，椎間盤發(fā)生早期退變;基因轉(zhuǎn)染后椎間盤的

3、改變:影像學(xué)檢測(cè):A、B、C組椎間隙較E組有明顯恢復(fù)，其中A組最明顯;D、E組椎間隙無(wú)明顯差異。分子生物學(xué)檢測(cè):基因轉(zhuǎn)染后3、6、9周后Western blot結(jié)果示:A、B、C組髓核組織Ⅱ型膠原和蛋白多糖的表達(dá)較E組增高，各組均有顯著差異;D、E組比較無(wú)顯著差異;A組髓核組織Ⅱ型膠原和蛋白多糖的表達(dá)高于B、C組，各組均有顯著差異。
　　 結(jié)論:本方法可以成功建立一種椎間盤退變動(dòng)物模型;SOX9基因可以明顯提高Ⅱ型膠原的表達(dá)，不