浙江地區(qū)急性腹瀉患者中人類杯狀病毒分子流行病學研究.pdf

1、[背景和目的]
　　 人類杯狀病毒(HumanCaliciviruses，HuCVs)包括諾如病毒(Norovirus，NV)和札如病毒(Sapovirus，SAV)，是引起全世界人類非細菌性急性胃腸炎暴發(fā)的主要病原，也是僅次于輪狀病毒引起嬰幼兒急性腹瀉散發(fā)的常見病原之一。
　　 諾如病毒又稱諾瓦克樣病毒(Norwalk-likevirus)，最初由Kapikian等在1972年通過免疫電鏡的方法從美國俄亥俄州諾瓦克鎮(zhèn)一

2、起非細菌性胃腸炎暴發(fā)的患者糞便中分離得到；札如病毒(Sapovirus，SAV)以前稱札幌樣病毒(Sapporo-likevirus)，因最初于1977年在日本札幌市被發(fā)現(xiàn)而命名，是人和豬非細菌性急性胃腸炎的主要病原體之一。長期以來，由于對杯狀病毒缺乏簡易、敏感的檢測手段，使其導致人類患病的危害被嚴重低估。
　　 近年來，隨著對杯狀病毒分子流行病學研究的深入，其重要性和危害性正逐漸被全面、系統(tǒng)的認識。2005年1月，加拿大和美國

3、相繼宣布暴發(fā)NV感染，引起了人們的廣泛關注。2006年11月，日本、新加坡、意大利等地相繼發(fā)生了NV集體感染事件，特別是日本暴發(fā)了25年來最嚴重的傳染性胃腸炎疫情，不到兩個月累計發(fā)生35.76萬人感染NV，引起了全球的廣泛關注。同期我國包括北京、廣東佛山、福建等省市均出現(xiàn)NV疫情，據(jù)全國病毒性腹瀉監(jiān)測網(wǎng)對11個省份5歲以下腹瀉兒童的監(jiān)測，NV檢出率為15％左右。由于該病毒傳染性很強，常可導致突發(fā)性公共衛(wèi)生事件，美國已將其列為乙類生物恐怖

4、因子。美國疾病控制中心(CDC)最新估計，96％的非細菌胃腸炎暴發(fā)與NV有關，而SAV則是嬰兒和小齡兒童病毒性腹瀉的主要病原體。
　　 我國對諾如病毒的研究起步較晚，1995年方肇寅等首次在我國嬰幼兒腹瀉糞便標本中檢測到諾如病毒。此后，北京、長春、河北、蘭州、廣州、福州等地均在兒童腹瀉糞便標本中檢出NV。最近方肇寅等人在對1999年至2005年來自我國13個地區(qū)的嬰幼兒腹瀉糞便HuCVs研究中其陽性率為8.3％～38.6％，主要

5、以NV為主，檢出率僅次于RV，表明我國AGE病例中NV感染也相當普遍。
　　 札如病毒在世界各地都有報道，2005年2月，日本某幼兒園中23人(包括6名成人)感染SAV病毒。我國上海交大華修國等于2008年在國內不明原因腹瀉人群與腹瀉仔豬體內分離到一種新的杯狀病毒，經過鑒定和動物回歸實驗證明該病毒為SAV。目前，國際上SAV的總體研究水平還處于起步階段。
　　 雖然杯狀病毒感染在我國普遍存在，但是浙江地區(qū)杯狀病毒感染的分

6、子流行特征尚缺乏系統(tǒng)研究，因此，研究杯狀病毒在浙江地區(qū)的分子流行病學規(guī)律、流行毒株特征及進化情況，可以為本地區(qū)杯狀病毒引起的急性腹瀉的防治提供科學依據(jù)，對我國急性腹瀉的預防控制工作也具有重要意義。
　　 [對象和方法]
　　 1.研究對象
　　 2009年1月至2011年1月來自浙江地區(qū)5個哨點醫(yī)院腸道門診(包括杭州、寧波、紹興、湖州、衢州)就診的急性腹瀉患者3153例，包括5歲以下嬰幼兒和成人。每日腹瀉次數(shù)超過

7、3次或大便性狀出現(xiàn)明顯異常(水瀉樣、蛋花湯樣、粘液樣或粘糊樣)定義為腹瀉病例。
　　 2.實驗方法
　　 2009-2011年監(jiān)測期間連續(xù)收集以上3153例急性腹瀉患者的糞便標本，并同時進行調查，填寫調查表，電話隨訪完善調查表。對收集的標本采用多重PCR方法進行輪狀病毒(RV)、杯狀病毒(NV和SAV)等病毒檢測，并選取部分擴增后的杯狀病毒陽性產物進行序列測定，應用DNAMAN(5.1.0.0)和MEGA4.0軟件對杯狀

8、病毒和相關參考株進行序列的多重比對和系統(tǒng)進化分析。
　　 [結果]
　　 1.2009年1月至2011年1月，本研究共檢測浙江地區(qū)3153份急性腹瀉標本，杯狀病毒檢出率較高，為18.42％，僅次于輪狀病毒的檢出率(20.10％)。
　　 2.諾如病毒共檢出265份(12.36％，265/2144；52份為NV-GⅠ基因型，213份為NV-GⅡ基因型)；札如病毒檢出率為6.06％(130/2144)。<5歲組檢出率

9、最高，其次是15～65歲組，5～15歲組檢出率最低。浙江地區(qū)急性腹瀉患者中杯狀病毒感染全年均有發(fā)生，以冬春季節(jié)(11～4月)感染較多，另外夏季(6～8月)檢出率也相對較高。
　　 3.隨機抽取15株諾如病毒和10株SAV進行測序分析，NV基因型別包括：GⅠ-1(3株)、GⅠ-2(1株)、GⅡ-4/2006b變異株(7株)、GⅡ-2(1株)、GⅡ-7(1株)和GⅡ-4/2008變異株(2株)；SAV基因型別包括：GⅠ-2(5株)、

10、GⅠ-1(4株)和GⅡ-1(1株)。
　　 [結論]
　　 1.杯狀病毒是浙江地區(qū)引起急性腹瀉的一個重要病原，僅次于輪狀病毒的檢出率，且諾如病毒檢出率高于札如病毒。該病毒主要感染五歲以下嬰幼兒，冬春季節(jié)為感染高發(fā)季節(jié)。
　　 2.浙江地區(qū)急性腹瀉患者杯狀病毒感染呈現(xiàn)遺傳多樣性特征，諾如病毒在浙江地區(qū)包括GⅠ-1、GⅠ-2、GⅡ-2、GⅡ-7、GⅡ-4五個基因型，GⅡ-4/2006b可能是本地區(qū)的流行優(yōu)勢株；札如病