卡價(jià)苗接種地區(qū)免疫功能不全患者潛伏性結(jié)核感染免疫學(xué)診斷及免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分：免疫介導(dǎo)炎性疾病人群中潛伏性結(jié)核感染的免疫學(xué)診斷研究
　　目的：評(píng)價(jià)新型γ干擾素釋放試驗(yàn)(TSPOT.TB技術(shù))及傳統(tǒng)結(jié)核菌素皮試(tuberculin skin test，TST檢測(cè))在BCG接種地區(qū)免疫介導(dǎo)炎性疾病(immune mediated inflammatory diseases，IMID)患者中檢測(cè)潛伏性結(jié)核感染的免疫診斷價(jià)值，探討B(tài)CG高接種率地區(qū)該類(lèi)特殊人群中潛伏性結(jié)核感染者的特異性抗結(jié)核細(xì)胞免疫應(yīng)答

2、反應(yīng)。
　　方法：同時(shí)應(yīng)用TSPOT.TB檢測(cè)及傳統(tǒng)TST檢測(cè)方法，對(duì)中國(guó)東部地區(qū)294例明確診斷的IMID患者及48例正常健康對(duì)照者進(jìn)行潛伏性結(jié)核感染的篩查。比較不同亞組中各檢測(cè)方法陽(yáng)性率、危險(xiǎn)因素關(guān)聯(lián)性及抗原特異性宿主免疫應(yīng)答反應(yīng)差異。
　　結(jié)果：IMID患者人群中TSPOT.TB陽(yáng)性率為27.2％，TST陽(yáng)性率為51.4％(硬結(jié)直徑≥5mm)或38.4％(硬結(jié)直徑≥10mm)。正常健康對(duì)照組中TSPOT.TB陽(yáng)性率為2

3、0.8％，TST檢測(cè)陽(yáng)性率為64.6％(硬結(jié)直徑≥5mm)或50.0％(硬結(jié)直徑≥10mm)。兩組人群中的TST陽(yáng)性率均顯著高于TSPOT.TB陽(yáng)性率(P值均<0.0001)。IMID患者中的TST陽(yáng)性率低于正常健康對(duì)照者，而TSPOT.TB陽(yáng)性率則高于正常健康對(duì)照者。與正常健康人群相比，IMID患者中的潛伏性結(jié)核感染更易被TST檢測(cè)漏診或誤診。在IMID患者中，BCG接種史和近期糖皮質(zhì)激素治療史均會(huì)對(duì)TST結(jié)果產(chǎn)生顯著影響(OR值分別

4、為2.05和0.56，P值均<0.05)，但TSPOT.TB結(jié)果不受這些因素的影響。各人群亞組間的抗原特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)差異也與檢測(cè)陽(yáng)性率差異及危險(xiǎn)因素關(guān)聯(lián)性一致。推測(cè)在BCG接種地區(qū)使用TST檢測(cè)來(lái)初篩IMID患者人群中的潛伏性結(jié)核感染時(shí)，可能更適宜使用硬結(jié)直徑≥10mm作為T(mén)ST陽(yáng)性結(jié)果的Cut-off值。
　　結(jié)論：在BCG高接種率地區(qū)的IMID患者人群中用TSPOT.TB檢測(cè)診斷潛伏結(jié)核感染要比TST檢測(cè)更為敏感和可靠，尤

5、其對(duì)已接受免疫抑制劑治療的IMID患者高危人群有著獨(dú)特的應(yīng)用價(jià)值。
　　第二部分：HIV陽(yáng)性感染人群中潛伏性結(jié)核感染的免疫學(xué)診斷研究
　　目的：調(diào)查中國(guó)西南地區(qū)HIV合并活動(dòng)性結(jié)核感染和HIV合并潛伏性結(jié)核感染的疾病負(fù)擔(dān)，評(píng)價(jià)新型γ干擾素釋放試驗(yàn)(TSPOT.TB檢測(cè))及傳統(tǒng)結(jié)核菌素皮試(TST檢測(cè))在BCG高接種率地區(qū)HIV陽(yáng)性感染人群中用于檢測(cè)活動(dòng)性及潛伏性結(jié)核感染的免疫診斷價(jià)值。
　　方法：采用TSPOT.TB檢

6、測(cè)技術(shù)共對(duì)中國(guó)西南地區(qū)100例明確診斷的HIV陽(yáng)性感染者(其中32例為明確診斷的合并活動(dòng)性結(jié)核病患者)血液標(biāo)本進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌抗原特異性T細(xì)胞的檢測(cè)，同時(shí)對(duì)所有病例進(jìn)行TST檢測(cè)。
　　結(jié)果：100例HIV感染者中共有32例HIV合并活動(dòng)性結(jié)核病者(HIV+ATB組)，46例HIV合并潛伏性結(jié)核感染者(HIV+LTB組)和22例單純HIV感染者(HIV+TB-組)。臨床上無(wú)活動(dòng)性結(jié)核感染證據(jù)的HIV陽(yáng)性感染者中合并潛伏性結(jié)核的感染

7、率高達(dá)67.6％。在TST結(jié)果為陰性的HIV感染者中，HIV+ATB患者和無(wú)活動(dòng)性結(jié)核感染證據(jù)的HIV陽(yáng)性感染者的TSPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性率分別為66.7％(16/24例)和47.5％(19/40例)。在CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)<500/μl的HIV感染者中，HIV+ATB患者和無(wú)活動(dòng)性結(jié)核感染證據(jù)的HIV陽(yáng)性感染者的TSPOT.TB陽(yáng)性率均顯著高于TST陽(yáng)性率(66.7％vs.23.8％，55.6％vs.22.2％以及44.4％vs.11.

8、1％，69.2％vs.42.3％，P值均<0.0001)。在抗結(jié)核治療小于1月及CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)≥200/gl的HIV+ATB組患者中，TSPOT.TB陽(yáng)性率高達(dá)85％以上；但在抗結(jié)核治療大于3月及CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)<200/μl的HIV+ATB組患者中，TSPOT.TB陽(yáng)性率僅有33.3％。在無(wú)活動(dòng)性結(jié)核感染證據(jù)的HIV陽(yáng)性感染者中，TSPOT.TB檢測(cè)陽(yáng)性率不受CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)水平影響(P>0.05)；但TST檢測(cè)在CD4<200/

9、μl組中的陽(yáng)性率遠(yuǎn)低于CD4≥200/μl組(11.11％vs.46.55％，P<0.05)。
　　結(jié)論：我國(guó)無(wú)活動(dòng)性結(jié)核感染臨床證據(jù)的HIV感染人群中有較高的結(jié)核潛伏感染率。與傳統(tǒng)TST檢測(cè)相比，新型γ干擾素釋放試驗(yàn)(TSPOT.TB檢測(cè))在BCG高接種率地區(qū)的HIV陽(yáng)性感染者中診斷結(jié)核分枝桿菌感染要更加敏感和快速，在HIV合并潛伏性結(jié)核感染的早期快速診斷中有較大應(yīng)用價(jià)值。TSPOT.TB檢測(cè)不受CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)水平影響，在中國(guó)H

10、IV合并潛伏性結(jié)核感染者中可更有效地指導(dǎo)異煙肼預(yù)防性治療及結(jié)核病防控。
　　第三部分：HIV陽(yáng)性感染人群中潛伏性結(jié)核進(jìn)展為活動(dòng)性結(jié)核的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制研究
　　目的：評(píng)價(jià)HIV/AIDS合并潛伏性結(jié)核感染及合并活動(dòng)性結(jié)核感染者中結(jié)核分枝桿菌肽類(lèi)抗原特異性CD4+及CD8+T細(xì)胞免疫應(yīng)答功能，以及非肽類(lèi)抗原特異性Vγ2Vδ2+T細(xì)胞免疫應(yīng)答功能，探討B(tài)CG高接種率地區(qū)HIV感染人群中潛伏性結(jié)核進(jìn)展為活動(dòng)性結(jié)核的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制。<

11、br>　　方法：對(duì)云南省100例明確診斷的HIV/AlDS感染者按臨床癥狀、胸片和TSPOT.TB檢測(cè)結(jié)果分為HIV合并活動(dòng)性結(jié)核感染(HIV+ATB)組、HIV合并潛伏性結(jié)核感染(HIV+LTB)組及HIV未合并結(jié)核感染(HIV+TB-)組。應(yīng)用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法(ELISPOT)及細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色(ICS)技術(shù)檢測(cè)各組病例經(jīng)體外抗原刺激后外周血淋巴細(xì)胞中結(jié)核分枝桿菌PPD特異性IFNγ+CD4+和IFNγ+CD8+T細(xì)胞數(shù)量水平。以及

12、磷酸化抗原HMBPP特異性IFNγ+Vγ2Vδ2+T細(xì)胞數(shù)量水平。
　　結(jié)果：PPD特異性IFNγ+CD4+T細(xì)胞數(shù)量在HIV+ATB組及HIV+LTB組中均處于較低水平，且與外周血CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)水平無(wú)關(guān)。但HIV+LTB組患者的PPD特異性IFNγ+CD8+T細(xì)胞數(shù)量水平要顯著高于HIV+ATB組。另外，HIV+LTB組患者的HMBPP特異性IFNγ+Vγ2Vδ2+T細(xì)胞數(shù)量水平也遠(yuǎn)高于HIV+ATB組(P<0.0001)，

13、且這種顯著性差異在CD4+T細(xì)胞<200/μl或≥200/μl的HIV+LTB亞組中均存在。在HIV合并潛伏性結(jié)核感染者中，HMBPP特異性IFNγ+Vγ2Vδ2+T細(xì)胞數(shù)量甚至是PPD特異性IFNγ+CD8+T細(xì)胞數(shù)量的7倍之多。
　　結(jié)論：不同于HIV合并活動(dòng)性結(jié)核感染者，在我國(guó)HIV合并潛伏性結(jié)核感染者的外周血淋巴細(xì)胞中可檢測(cè)到顯著增強(qiáng)的HMBPP特異性IFNγ+Vγ2Vδ2+T細(xì)胞及PPD特異性IFNγ+CD8+T細(xì)胞免疫