積雪草總皂苷精制工藝研究.pdf

1、目的：優(yōu)選積雪草總皂苷精制純化的最佳工藝條件，為正在研制的抗抑郁新藥“雪抑樂(lè)”提供符合純度要求的原料。 方法：以積雪草總皂苷含量作為精制工藝評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用香草醛—高氯酸比色法測(cè)定積雪草總皂苷含量。超聲波法提取積雪草總皂苷：精密稱取積雪草藥材適量，粉碎成粗粉（約10目），料液比1：12，加入12倍量60%乙醇浸泡20h，超聲提取1h，提取一次，過(guò)濾，得積雪草總皂苷提取液。選取大孔吸附樹(shù)脂精制積雪草總皂苷：以積雪草總皂苷吸附率及解吸

2、率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，運(yùn)用靜態(tài)吸附及解吸附實(shí)驗(yàn)對(duì)大孔吸附樹(shù)脂HPD100、DM130、AB—8及D101型4種型號(hào)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行篩選，選取積雪草總皂苷的最佳吸附劑；通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)，以積雪草提取液通過(guò)預(yù)處理的樹(shù)脂柱后皂苷的吸附量為指標(biāo)，考察大孔吸附樹(shù)脂富集、純化皂苷的吸附性能和洗脫參數(shù)，包括吸附工藝中上柱液PH、徑高比、流速、上樣液濃度及上樣量等因素對(duì)積雪草總皂苷吸附量的影響。采用不同濃度及用量的乙醇進(jìn)行梯度洗脫，選取最佳的洗脫工藝，并對(duì)樹(shù)脂的

3、再生進(jìn)行考察。 結(jié)果：通過(guò)方法學(xué)考察，香草醛—高氯酸比色法準(zhǔn)確度、精密度、穩(wěn)定性以及靈敏度均較好，由于比色法不需特殊儀器設(shè)備、成本低、采用的試劑較HPLC法環(huán)保、價(jià)廉，因此本實(shí)驗(yàn)采用香草醛—高氯酸比色法作為工藝研究中積雪草總皂苷含量測(cè)定方法。在靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)中，選用靜態(tài)吸附率及解吸附率比較好的非極性D101型大孔吸附樹(shù)脂精制皂苷，樹(shù)脂有較好的吸附分離性能，適合于積雪草總皂苷的純化。積雪草提取液通過(guò)處理過(guò)的D101型大孔吸附樹(shù)脂，測(cè)

4、得樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附量為26．98mg/g干樹(shù)脂，徑高比為1：10（樹(shù)脂柱1．5cm×36cm），積雪草上樣液PH值為7．0，上樣液質(zhì)量濃度為0．8g生藥/mL，流速為4BV/h（4倍柱體積/小時(shí)），最大上樣量為8mL；上樣吸附后，先用SBV蒸餾水洗去水溶性雜質(zhì)，再用體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇洗脫皂苷，用量為4BV，沈脫率達(dá)97．3%，收集過(guò)柱后的積雪草總皂苷乙醇洗脫液，水浴濃縮，真空干燥至恒重，得積雪草總皂苷精制品，得率為2．28%（精制品中積

5、雪草總苷g/積雪草藥材g），將總皂苷精制品用無(wú)水乙醇溶解，采用香草醛一高氯酸比色法測(cè)得積雪草總皂苷純度由上柱前4．3%上升到33．3%，精制度達(dá)776．7%。在吸附—洗脫穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中，樹(shù)脂重復(fù)使用3次后總皂苷的回收率降低了20%以上，必須再生方可繼續(xù)使用。 結(jié)論：香草醛—高氯酸比色法操作較為簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確度，精密度以及靈敏度較好，且檢測(cè)成本低，適合積雪草總皂苷精制工藝研究中積雪草總皂苷的測(cè)定。在所確定的工藝條件下，采用D101型大孔