大黃魚野生群體和養(yǎng)殖群體鑒定技術(shù)研究.pdf

1、大黃魚（Larimichthys crocea）屬鱸形目、石首魚科、黃魚屬，是我國特有的重要海水經(jīng)濟(jì)魚類。隨著環(huán)境惡化和過度捕撈使得野生大黃魚資源遭到毀滅性的破壞，天然捕撈資源急劇下降，為了恢復(fù)和保護(hù)大黃魚資源，我國水產(chǎn)科技工作者對大黃魚人工繁殖與苗種培育進(jìn)行了大量的研究試驗(yàn)，取得了一系列顯著性的成果，推動了大黃魚養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，目前大黃魚資源已經(jīng)轉(zhuǎn)變?yōu)槿斯ゐB(yǎng)殖群體為主，野生群體為輔的狀況，但在漁業(yè)生產(chǎn)與管理過程中如何對大黃魚種質(zhì)資源

2、進(jìn)行鑒定尚缺乏一套科學(xué)可靠的研究技術(shù)和方法。因此，本研究借助大黃魚的外部形態(tài)、鱗片特征、耳石輪紋，骨骼m(xù)icro CT掃描顯微結(jié)構(gòu)，線粒體D-loop區(qū)和Cytb基因以及基于核基因的微衛(wèi)星標(biāo)記等技術(shù)手段，比較和分析了大黃魚野生群體和養(yǎng)殖群體的種質(zhì)差異，以期為大黃魚種質(zhì)鑒定和資源管理提供科學(xué)可靠的依據(jù)。具體研究結(jié)果如下：
　　（1）通過對大黃魚野生群體和養(yǎng)殖群體的形態(tài)性狀、鱗片與矢耳石輪紋特征進(jìn)行了分析比較。形態(tài)性狀比較結(jié)果表明，養(yǎng)

3、殖群體的肥滿度(Fatness)、體高(BH)/體長(BL)、體厚（BT）/體長（BL）和尾柄高（CPH）/尾長（TL）比值顯著大于野生群體(P＜0.01)，野生群體軀干長（TL）/體長（BL）比值大于養(yǎng)殖群體(P＜0.05)，養(yǎng)殖群體在體型上出現(xiàn)偏短、粗現(xiàn)象。養(yǎng)殖群體與野生群體在鱗片輪紋特征上無顯著差異，部分個體鱗片上觀察到有年輪和副輪分布。野生群體耳石輪紋較為致密，明暗帶間隔不均，耳石中心核及周圍區(qū)域?yàn)樯铧S色，年齡組成復(fù)雜，有0～2

4、個年輪；養(yǎng)殖群體耳石輪紋較稀疏，明暗帶間隔均勻，耳石中心核及周圍區(qū)域較透明，觀察到有1個年輪。這些差異間接反映了兩個群體在生活環(huán)境條件、食物餌料供給方面的差異。
　?。?）運(yùn)用Micro CT技術(shù)對大黃魚全魚骨骼系統(tǒng)進(jìn)行了掃描與三維重建，比較了野生群體和養(yǎng)殖群體背部和尾部脊椎骨顯微結(jié)構(gòu)參數(shù)差異。結(jié)果顯示，大黃魚脊椎骨與頭骨、尾骨相連，脊椎骨26個，肋骨附著在第1～11腹椎，無肌間刺，胸鰭位于頭骨后，背鰭、腹鰭、臀鰭和尾鰭與脊椎骨不

5、相連。大黃魚野生群體背部和尾部脊椎骨的組織礦物質(zhì)密度（TMD）和骨礦物質(zhì)密度（BMD）均顯著高于養(yǎng)殖群體（P＜0.01），骨體積分?jǐn)?shù)（BV/TV）較養(yǎng)殖群體大（P＜0.05），骨小梁間隔（Tb.Sp）較養(yǎng)殖群體?。≒＜0.05），骨小梁數(shù)量（TB.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）和結(jié)構(gòu)模型指數(shù)（SMI）上沒有差別（P＞0.05）。造成這些差異的主要原因可能與野生群體和養(yǎng)殖群體食物組成、生活環(huán)境以及活動情況等差異有關(guān)。
　?。?）利用

6、大黃魚線粒體（mtDNA）D-loop區(qū)和Cytb基因中的788bp和1028bp片段，比較分析了大黃魚野生群體和養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性與群體遺傳結(jié)構(gòu)差異，結(jié)果表明，在105個樣本Cytb的1028bp片段中，共檢測到20個變異位點(diǎn)，大黃魚野生群體YS含19個變異位點(diǎn)，繁育群體FY含15個，選育群體F3代含14個、F4代含8個，遺傳多樣性指數(shù)分析結(jié)果顯示，野生群體單倍型多樣性指數(shù)（Hd）為0.842，核苷酸多樣性指數(shù)（π）為0.00575

7、，繁育群體相應(yīng)參數(shù)為0.789、0.00491，選育群體F3代、F4代相應(yīng)參數(shù)分別為0.699、0.00355，0.607、0.00332。單倍型多樣度顯示，野生群體含有12個單倍型，特有單倍型7個，均高于養(yǎng)殖群體相應(yīng)參數(shù)。在109個樣本D-loop區(qū)的788bp片段中，共檢測到33個變異位點(diǎn)，大黃魚野生群體YS含29個變異位點(diǎn)，繁育群體FY含20個，選育群體F3代18個、F4代14個，遺傳多樣性指數(shù)分析結(jié)果顯示，野生群體單倍型多樣性指

8、數(shù)（Hd）為0.901，核苷酸多樣性指數(shù)（π）為0.01826，繁育群體相應(yīng)參數(shù)為0.813、0.01778，選育群體F3代、F4代相應(yīng)參數(shù)分別為0.677、0.01391，0.727、0.1471。單倍型多樣度顯示野生群體含有15個單倍型，特有單倍型11個，同樣高于養(yǎng)殖群體單倍型多樣度。由結(jié)果可知，大黃魚野生群體遺傳多樣性水平高于養(yǎng)殖群體。根據(jù)遺傳分化指數(shù)Fst值以及分子方差分析（AMOVA）可知，大黃魚遺傳變異主要來自群體內(nèi)個體之間

9、，養(yǎng)殖群體內(nèi)部遺傳分化并不顯著，而大黃魚野生群體與養(yǎng)殖群體兩個組群間出現(xiàn)了顯著的中等水平遺傳分化，UPGMA系統(tǒng)進(jìn)化樹和單倍型網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖也支持這一觀點(diǎn)。由于D-loop區(qū)不編碼蛋白質(zhì)，突變位點(diǎn)較多，進(jìn)化速率快更加適用于遺傳差異不顯著的種內(nèi)群體間，因此是大黃魚種質(zhì)鑒定中可靠的分析位點(diǎn)。
　?。?）選用12對微衛(wèi)星（SSR）標(biāo)記對官井洋采捕的大黃魚野生群體 YS和2005年從官井洋采捕的野生大黃魚經(jīng)過人工世代選育的F3代、F4代，以及

10、繁育群體FY進(jìn)行了比較研究，結(jié)果表明，12個微衛(wèi)星位點(diǎn)的等位基因數(shù)目范圍為4～10，平均觀測雜合度（HO），期望雜合度（HE）和多態(tài)信息含量（PIC）分別為0.745,0.753和0.691，所選位點(diǎn)表現(xiàn)出高度多態(tài)性，其中含1個群體間特異性位點(diǎn)LYC08。野生群體YS觀測雜合度（HO=0.791）、期望雜合度（HE=0.776）和shannon指數(shù)（I=1.674），繁育群體FY、選育群體F3代、F4代相應(yīng)參數(shù)分別為0.744、0.76

11、4、1.552；0.728、0.736、1.483；0.717、0.735、1.401，表明野生群體具有較高的遺傳多樣性水平。近交系數(shù)結(jié)果顯示FIS最高值出現(xiàn)在F4代群體（FIS=0.019），其次為F3代群體（FIS=0.013）、繁育群體FY（FIS=0.011），3個人工養(yǎng)殖群體中均存在雜合子缺失現(xiàn)象。分子方差分析（AMOVA）表明野生群體與養(yǎng)殖群體組間的遺傳差異極顯著（P＜0.01）?；贜ei’s遺傳距離構(gòu)建的NJ樹、主成分分