MicroRNA-376c靶向調控TGFA抑制骨肉瘤細胞增殖與轉移的研究.pdf

1、目的:
　　為miR-376c可以通過靶向調控TGFA抑制骨肉瘤細胞增殖與轉移提供證據。
　　方法:
　　1、臨床選取13例骨肉瘤組織標本及配對正常骨骼肌組織標本;選取人正常成骨細胞為對照，選取三株骨肉瘤細胞作為實驗組，QPCR技術檢測骨肉瘤組織與細胞中miR-376c與TGFAmRNA的表達差異。
　　2、利用miR-376c模擬物轉染骨肉瘤Saos-2細胞，Westernblot檢測TGFA和EGFR的表達，

2、接著過表達TGFA，回復miR-376c抑制TGFA和EGFR表達的效應。
　　3、利用雙熒光素酶報告基因進一步驗證miR-376c對TGFA的靶向調控作用。
　　4、構建miR-376c慢病毒載體，感染Saos-2細胞，用CCK8和Transwell方法檢測miR-376c對Saos-2細胞增殖和侵襲能力的影響，接著過表達TGFA，回復miR-376c對Saos-2細胞的生物學效應。
　　結果:
　　1、組織水

3、平QPCR結果顯示，miR-376c在骨肉瘤組織中特異低表達，TGFA在骨肉瘤組織中特異高表達，且兩者具有很好的負相關性;細胞水平QPCR結果顯示，miR-376c在骨肉瘤細胞中特異低表達，TGFA在骨肉瘤細胞中特異高表達，與組織水平表達趨勢一致。
　　2、miR-376c模擬物轉染Saos-2細胞，miR-376c過表達，同時TGFA和EGFR表達受到顯著抑制;當TGFA過表達后，可回復miR-376c抑制效應。
　　3、

4、成功構建miR-376c慢病毒載體，感染Saos-2細胞，GFP熒光圖片顯示，感染效率在8()上。細胞功能學結果顯示miR-376c過表達可顯著抑制Saos-2細胞增殖能力和侵襲能力，當TGFA過表達后，可回復miR-376c對Saos-2細胞的功能學效應。
　　結論:
　　1、miR-376c與TGFA表達在骨肉瘤組織和細胞水平均成負相關關系。
　　2、miR-376c通過靶向結合TGFA3'-UTR上預測的miR-