高良姜素抑制骨肉瘤細(xì)胞及其機(jī)制.pdf

1、背景：
　　骨肉瘤是惡性骨腫瘤中最常見的腫瘤之一。它常發(fā)生于年輕患者。骨肉瘤細(xì)胞增殖比較快，并且易于侵襲周圍組織。當(dāng)前的抑制該腫瘤進(jìn)展的主要治療方案為手術(shù)切除并加以新輔助化療。但化療藥物存在副作用，這限制了其長(zhǎng)期使用。之前有研究報(bào)道，高良姜素可抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，但是否能抑制骨肉瘤細(xì)胞還不清楚。
　　目的：
　　該研究的目的是探究高良姜素對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲能力的影響，并探索高良姜素

2、作用于骨肉瘤細(xì)胞的潛在機(jī)制。
　　方法：
　　1.通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)估高良姜素對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的增殖的影響。用紫外分光儀檢測(cè)OD值，檢測(cè)的波長(zhǎng)為570納米。最后用SPSS19.0軟件統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)，并且計(jì)算半數(shù)致死劑量(LC50)。
　　2.分別用Hoechst33258染色和細(xì)胞流式計(jì)數(shù)來(lái)評(píng)估高良姜素對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的凋亡的影響。在前一實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞經(jīng)染色后直接在光學(xué)顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)。細(xì)胞核為亮藍(lán)色的細(xì)胞代表已發(fā)生凋亡的細(xì)胞。

3、在后一實(shí)驗(yàn)中需要用到Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡試劑盒，然后用FACScan細(xì)胞流式儀檢測(cè)結(jié)果。標(biāo)記為Annexin V(+)/PI(-)的細(xì)胞被認(rèn)為屬于早期凋亡細(xì)胞。而標(biāo)記為Annexin V(+)/PI(+)的細(xì)胞被認(rèn)為屬于晚期凋亡細(xì)胞。
　　3.分別用劃痕實(shí)驗(yàn)和穿膜實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)估高良姜素對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲的影響。在前一實(shí)驗(yàn)中，在種有骨肉瘤細(xì)胞的6孔板上劃出等寬的劃痕，然后分別在孵育24小時(shí)和48小時(shí)后，將6孔

4、板置于倒置顯微鏡下觀察拍照并計(jì)算劃痕的寬度。在后一實(shí)驗(yàn)中需要用Transwell孔板。將骨肉瘤細(xì)胞種于Transwell小孔的上表面，孵育48小時(shí)后在倒置顯微鏡下觀察Transwell小孔下表面上的細(xì)胞，拍照并計(jì)算細(xì)胞個(gè)數(shù)。
　　4.用蛋白質(zhì)印記的方法來(lái)評(píng)估受高良姜素處理后的骨肉瘤細(xì)胞中與細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲相關(guān)的調(diào)控因子的蛋白表達(dá)水平的變化。蛋白條帶用LAS-4000科學(xué)成像系統(tǒng)曝光，最后用Image J軟件分析數(shù)據(jù)。

5、r>　　結(jié)果：
　　MG63和U20S細(xì)胞經(jīng)高良姜素處理后，兩種骨肉瘤細(xì)胞的增殖能力都顯著下降。MG63細(xì)胞經(jīng)高良姜素處理后，其細(xì)胞凋亡顯著地增加了。MG63細(xì)胞的遷移和侵襲能力也顯著地下降了。與此同時(shí)，MG63細(xì)胞中的PI3K和Aktp-Thr308的蛋白表達(dá)量明顯下降了，但Akt總蛋白的表達(dá)量沒(méi)有改變。位于PI3K和Akt下游的調(diào)控因子Cyclin D1、MMP-2和MMP-9的蛋白表達(dá)量均下降，而p27Kip1、caspas