麻疹病毒基因分型及血清學(xué)研究.pdf

1、目的:了解天津市源自病人的麻疹病毒野毒株的基因變異狀況及評(píng)價(jià)麻疹減毒活疫苗的免疫保護(hù)效果。
　　 方法:
　　 1.采集2002～2008年疑似麻疹患者的咽拭子和尿液標(biāo)本,用Vero-SLAM細(xì)胞分離麻疹病毒；
　　 2.提取病毒培養(yǎng)液中的RNA,用一步RT-PCR方法擴(kuò)增麻疹病毒編碼核蛋白(nucleoprotein)的N基因C端594個(gè)核苷酸片段,擴(kuò)增產(chǎn)物直接測(cè)序后與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行生物信息學(xué)分析；
　　

2、 3.使用GENRUNER軟件篩選N基因C端594個(gè)核苷酸片段的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn),確定BcnⅠ用來(lái)建立RT-PCR-RFLP的麻疹病毒基因分型方法,以區(qū)分麻疹病毒疫苗株和中國(guó)流行的野毒株；
　　 4.采用酶聯(lián)免疫吸附方法對(duì)8月齡以下嬰兒麻疹疫苗初免前的抗體水平進(jìn)行分析,了解保護(hù)性抗體的衰減過(guò)程；
　　 5.采用酶聯(lián)免疫吸附方法和中和抗體檢測(cè)法對(duì)接種麻疹減毒活疫苗的健康人群免疫前后的抗體水平進(jìn)行測(cè)定,評(píng)價(jià)麻疹減毒活疫苗對(duì)

3、流行病毒株的保護(hù)效果；
　　 6.采用酶聯(lián)免疫吸附方法檢測(cè)2010年麻疹疑似病例血清特異性IgM抗體,了解天津麻疹疫情變化趨勢(shì),據(jù)此評(píng)價(jià)麻疹計(jì)劃免疫和2008年麻疹強(qiáng)化免疫的效果。
　　 結(jié)果:
　　 1.采集2002～2008年天津地區(qū)散發(fā)和暴發(fā)的麻疹疑似病例標(biāo)本,共189份,其中132份尿液中分離到57株麻疹病毒,陽(yáng)性分離率為43.18％；采集57份咽拭子中分離到23株麻疹病毒,陽(yáng)性分離率為40.35％;

4、r>　　 2.在所有分離到的80株麻疹病毒株中有11人是咽拭子和尿液同時(shí)陽(yáng)性,取其一做PCR和序列分析,鑒定的總數(shù)為69株。69株麻疹病毒經(jīng)對(duì)N基因C端594bp的RT-PCR-RFLP證實(shí)均為H1基因型,其中除2002年1株(1.45％)病毒為H1b基因亞型,其余均為H1a(98.55％)基因亞型,未發(fā)現(xiàn)疫苗相關(guān)株(A基因型),表明H1a亞型為優(yōu)勢(shì)流行型；
　　 3.選取24株麻疹病毒進(jìn)行N基因C端450個(gè)核苷酸的種系發(fā)育分

5、析,2002～2008年流行的H1a亞型毒株的變異范圍為0.002～0.038(1～17個(gè)核苷酸差異),表明天津地區(qū)流行的麻疹是由不同麻疹病毒株的多個(gè)傳播鏈引起的；
　　 4.本論文建立的RT-PCR-RFLP方法可以區(qū)分中國(guó)麻疹病毒流行株H1a、H1b基因亞型及A基因型(疫苗株),與序列分析結(jié)果完全一致。該方法簡(jiǎn)便、快速、特異、經(jīng)濟(jì),適用于大量的流行病學(xué)調(diào)查；
　　 5.對(duì)922名不同年齡組健康人疫苗免疫前后的特異性I

6、gG抗體水平比較,顯示其陽(yáng)性率無(wú)顯著性差異；但抗體效價(jià)的幾何平均滴度(GMT)方差分析提示小于8月齡、高中二年級(jí)和20～25歲三個(gè)年齡組的GMT水平較低,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　 6.采用中和抗體法評(píng)價(jià)13名8月齡兒童麻疹疫苗初免后IgG抗體對(duì)疫苗株和流行病毒株的保護(hù)作用,兩者無(wú)顯著性差異,表明當(dāng)前使用麻疹減毒活疫苗預(yù)防的有效性；
　　 7.對(duì)160例8月齡以下嬰兒的麻疹保護(hù)性抗體水平進(jìn)行分析,新生兒麻疹I(lǐng)gG抗體陽(yáng)

7、性率僅為36.8％,到7月齡時(shí)降至12.5％,隨著月齡增長(zhǎng)逐漸衰減；
　　 8.2010年565例疑似麻疹病例中,小于8月齡組和大于14歲組共計(jì)509例(90.09％),遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于8月齡～14歲組(9.91％)。509例疑似病例,實(shí)驗(yàn)室確診329例,陽(yáng)性率高達(dá)64.64％,表明2008年麻疹強(qiáng)化免疫是有效的,但現(xiàn)行麻疹疫苗的免疫程序需要進(jìn)一步調(diào)整。
　　 結(jié)論:
　　 1.天津市流行的麻疹病毒株以H1a亞型為優(yōu)勢(shì)流

8、行型,N基因C端450個(gè)核苷酸分析顯示流行毒株間有1～17個(gè)核苷酸的差異,表明存在多個(gè)不同的傳播鏈,其變異屬于抗原漂移；
　　 2.8月齡兒童麻疹疫苗初免后產(chǎn)生的中和抗體對(duì)疫苗株和流行病毒株的保護(hù)作用無(wú)顯著性差異,表明當(dāng)前使用的麻疹減毒活疫苗用來(lái)預(yù)防是有效的；
　　 3.8月齡以下嬰兒麻疹疫苗初免前抗體平均濃度(GMC)隨著月齡增長(zhǎng)逐漸衰減,易感兒增多；不同年齡組健康人群疫苗免疫前后的特異性IgG抗體效價(jià)的幾何平均滴度(