戊型肝炎病毒感染的血清學(xué)特征及分子生物學(xué)診斷.pdf

1、戊型肝炎(H epatitis E，HE)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus，HEV)引起的一種急性病毒性肝炎，主要經(jīng)糞一口途徑傳播，常因飲用水源被污染而導(dǎo)致暴發(fā)流行，散發(fā)病例呈現(xiàn)全球分布。在我國的很多地區(qū)都有HEV感染的報道，HE流行率在我國為17.2％左右，各省市分布不均，農(nóng)村HEV感染率高于城市。根據(jù)HEV各分離株基因序列的核苷酸同源性、氨基酸同源性的大小以及系統(tǒng)進化樹的分析，目前將世界上HEV主要分為4個基因型

2、。臨床上急性HEV感染率占總?cè)丝诘?.5％～1％，感染率隨年齡增加而增加，20歲左右達到感染高峰，發(fā)病者主要為青壯年，其臨床表現(xiàn)主要是肝炎病毒引起的黃疸、急性肝壞死等。一般呈良性經(jīng)過，但孕婦感染情況較重，死亡率高達15％N25％，是一種全國普遍流行、危害比較嚴重的疾病。
　　 HEV是無包膜單股正鏈RNA病毒。HEV基因組全長約7.2～7.6kb，由5’和3’非結(jié)構(gòu)區(qū)及3個相互重疊的編碼閱讀框(Open Reading Fram

3、es.ORF)ORF1，ORF2和ORF3組成，基因組結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜。其中ORF2編碼病毒衣殼蛋白，富含HEV重要抗原表位。HEV組織培養(yǎng)研究尚不成熟，目前的診斷主要是采用間接酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)方法檢測血清中的抗體。但因為HEV感染窗口期或患者自身免疫功能以及檢測方法的特異性等原因都會給HEV診斷帶來不確定性；HEV RNA檢測是目前判斷HEV是否存在的標(biāo)準(zhǔn)之一，但由于HEV存在多種基因型，給臨床研究工作和疫苗的研制帶來了很多

4、困難。鑒于此，本課題建立了一種快速、敏感、特異性強的巢式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Nest ReverseTranscription- Polymerase Chain Reaction，nRT-PCR)方法，用于血清HEV RNA的定性檢測，并探討其在輔助臨床進行戊型肝炎早期診斷中的價值。
　　 研究目的:
　　 1、了解近年戊型肝炎病毒感染患者的臨床特征及血清學(xué)特點；分析比較單純感染和重疊感染的戊型肝炎患者的血清學(xué)特征異

5、同，闡明重疊感染的戊型肝炎患者病情的發(fā)展及預(yù)后情況。為HEV的臨床診治和進一步研究提供參考。
　　 2、建立巢式逆轉(zhuǎn)錄PCR擴增血清HEV RNA方法，評價其應(yīng)用于急性戊型肝炎患者血清HEV RNA檢測的臨床意義。
　　 研究方法:
　　 1、收集667例戊型肝炎病毒(HEV)感染以及戊型肝炎病毒重疊感染患者的相關(guān)血清學(xué)指標(biāo)并與乙型肝炎病毒(HBV)感染、丙型肝炎病毒(HCV)感染患者進行回顧性資料分析。診斷標(biāo)準(zhǔn)

6、依據(jù)2000年(西安)中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會聯(lián)合修訂的“病毒型肝炎防治方案”中的病毒型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。凡抗-HEV IgM和/或抗-HEV IgG陽性，并具有急性病毒性肝炎的臨床表現(xiàn)和肝功能異常者，診斷為急性戊型肝炎。
　　 2、對GenBank數(shù)據(jù)庫中的戊型肝炎病毒全基因組序列進行分析比對，并針對國內(nèi)流行的戊型肝炎病毒株序列，選擇位于ORF2的保守區(qū)域設(shè)計引物，建立nRT- PCR方法，并檢測126例急性戊

7、型肝炎患者、20例甲型肝炎患者、30例乙型肝炎患者和30例丙型肝炎患者血清中戊型肝炎病毒RNA，以30例健康獻血者作為對照組。全部樣品提取RNA后進行nRT- PCR檢測HEV RNA，并與檢測抗-HEV IgM的方法進行比較。
　　 研究結(jié)果:
　　 1、HEV感染病例多分布在21～40歲年齡段；且女性多于男性。在HEV陽性患者中，青少年組與青年組、中年組，老年組在ALP項差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。老年組HEV感染患者的各項

8、指標(biāo)都處于較高水平；HEV重疊感染患者的年齡高峰都是在21～40歲之間，低年齡組與高年齡組的多重感染率均較低。HEV感染組與HEV-HBV重疊感染組比較，ALP、TBIL存在明顯差別，膽汁淤積增多，黃疸程度加深。HEV感染組與HEV-HCV重疊感染組LDH差異顯著，肝細胞損傷明顯。
　　 2、126例急性戊型肝炎患者血清中有67例(53.2％) HEV RNA陽性。對照組血清HEVRNA檢測均為陰性。與血清抗-HEV IgM檢測

9、結(jié)果比較，HEV RNA檢測的總符合率為80.91％(102/126)，兩種方法的檢測結(jié)果具有良好的一致性。nRT- PCR方法檢測HEV RNA與血清抗-HEV IgM檢測方法存在明顯的差異，不能相互替代，而有一定的互補性。3例患者的首份血清檢測為HEV RNA陽性，但抗-HEV IgM為陰性，系列追蹤檢測，都相繼出現(xiàn)抗-HEV IgM。急性戊型肝炎患者血清HEV RNA的檢出多在發(fā)病的1～12天內(nèi)。
　　 研究結(jié)論: