中藥“球康”對雞球蟲病的防治及作用機(jī)理的研究.pdf

1、雞球蟲病是一種重要的寄生蟲病，該病分布廣，感染率高，常發(fā)生于15～50日齡的雛雞，若不能有效控制，其發(fā)病率達(dá)50﹪～70﹪，病死率可高達(dá)80﹪。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球養(yǎng)雞業(yè)每年因球蟲病造成的經(jīng)濟(jì)損失達(dá)10億英鎊。目前對該病的防治仍以化學(xué)合成藥及抗生素為主，但由于長期應(yīng)用，易產(chǎn)生抗藥性，且易在畜產(chǎn)品中造成藥物殘留而影響人類的健康。許多中藥對雞球蟲病都有防治效果，加上毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性和藥物殘留等優(yōu)點(diǎn)，在人們關(guān)注“綠色”食品的今天，中藥防治雞

2、球蟲病將會(huì)有更廣闊的前景。本課題在總結(jié)國內(nèi)外有關(guān)中藥防治球蟲病研究資料的基礎(chǔ)上，篩選出抗球蟲效果良好的中藥方劑“球康”并對其抗球蟲作用機(jī)理進(jìn)行研究。 第一，采用人工感染發(fā)病的方法，選取常山、苦參、青蒿、馬鞭草等19味中藥組成6個(gè)方劑，進(jìn)行抗柔嫩艾美爾球蟲的療效試驗(yàn)。結(jié)果6個(gè)方劑的抗球蟲指數(shù)(ACI)分別為121.4，138.6，155.9，111.5，914，107.4。中藥方劑Ⅱ和方劑Ⅲ的療效相對較好，抗球蟲指數(shù)較感染不給藥組

3、分別提高75.0﹪和96.8﹪，較磺胺五甲氧嘧啶組提高了13.6﹪和29.5﹪。擬命名中藥方劑Ⅲ為“球康”方，做為后續(xù)試驗(yàn)研究的基礎(chǔ)。 第二，研究了中藥“球康”300目微粉制劑對雞柔嫩艾美爾球蟲的療效。試驗(yàn)共設(shè)9個(gè)組：“球康”超微粉1﹪、2﹪、5﹪拌料給藥組、“球康”超微粉5g/100ml和2.5g/100m飲水給藥組、“球康”普通粉組(5﹪拌料)、克球嘉組(500mg/kg拌料)、感染不給藥組和不感染不給藥組。結(jié)果顯示：“球康

4、”超微粉2﹪、1﹪拌料組和克球嘉組抗球蟲指數(shù)分別為175.96、166.89、163.23，抗球蟲效果良好；普通粉組和微粉組(5﹪拌料)ACI分別為142.33和153.00，“球康”微粉5g/100ml和2.5g/100ml濃度飲水給藥組ACI分別為125.67和121.52，抗球蟲效果中等。 第三，通過觀察中藥“球康”對球蟲孢子化率和孢子化卵囊的影響，研究其體外抗柔嫩艾美爾球蟲的作用機(jī)理。結(jié)果表明：2﹪和5﹪濃度的“球康”分

5、別對球蟲卵囊作用1、5、10小時(shí)，均使卵囊的孢子化率明顯降低，其中2﹪濃度作用10小時(shí)組和5﹪濃度作用5，10小時(shí)組的孢子化率與2.5﹪重鉻酸鉀對照組差異極顯著(P＜0.01)。以2﹪、5﹪濃度的“球康”處理球蟲孢子化卵囊后再接種雞，“球康”處理組血便記分、盲腸卵囊數(shù)量和病變情況均優(yōu)于陽性對照組，其抗球蟲指數(shù)略低于10﹪福爾馬林組，高于陽性對照組。 第四，通過研究中藥“球康”對球蟲感染雞血液理化指標(biāo)及外周血CD4+、CD8+T淋

6、巴細(xì)胞亞群的影響，結(jié)合“球康”作用下柔嫩艾美爾球蟲內(nèi)生階段超微結(jié)構(gòu)的變化探討其體內(nèi)抗球蟲的作用機(jī)理。結(jié)果顯示，(1)感染球蟲組雞只紅細(xì)胞總數(shù)、血紅蛋白含量和紅細(xì)胞壓積較不感染組顯著降低(P＜0.05)。其中，感染給“球康”組相應(yīng)指標(biāo)高于感染不給藥組(P＜0.05)。感染給“球康”組白細(xì)胞總數(shù)則低于感染不給藥組，略高于不感染組(P＞0.05)。血液生化指標(biāo)方面，感染球蟲組雞只的血清鉀離子濃度高于不感染對照組(P＜0.01)，而感染給“球康

7、”組低于感染不給藥組，差異極顯著(P＜0.01)。對于血清總蛋白含量，感染球蟲組顯著低于不感染組(P＜0.05)，而感染給“球康”組高于感染不給藥組。感染球蟲組雞只的血清鈉、氯和磷離子濃度較不感染對照組有所下降，感染給“球康”組雞相應(yīng)的指標(biāo)略高于感染不給藥對照組，差異不顯著(P＞0.05)。在整個(gè)試驗(yàn)中，不感染給“球康”組雞只相應(yīng)血液理化指標(biāo)與不感染不給藥組差異不顯著(P＞0.05)。(2)在體內(nèi)，感染給“球康”組球蟲與感染不給藥組相比

8、主要表現(xiàn)出以下變化：部分裂殖子形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯變化，表現(xiàn)為啞鈴形、畸形和不規(guī)則形狀，裂殖子的頂體腫脹變圓；裂殖子內(nèi)部出現(xiàn)腫脹的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)；裂殖子外膜結(jié)構(gòu)模糊，有的地方出現(xiàn)破損，外膜與內(nèi)部細(xì)胞質(zhì)分離，出現(xiàn)大的空腔。球蟲微線消失，內(nèi)部出現(xiàn)環(huán)狀結(jié)構(gòu)；線粒體內(nèi)出現(xiàn)空泡和致密的電子團(tuán)塊；球蟲死亡，表現(xiàn)為蟲體外膜結(jié)構(gòu)模糊、消失，細(xì)胞質(zhì)逸出，出現(xiàn)空白的細(xì)胞腔，僅留下許多的支鏈淀粉顆粒；早期小配子內(nèi)部有很多空泡出現(xiàn)。(3)接種球蟲后，感染給中藥“球康”組C

9、D4+、CD8+T淋巴細(xì)胞百分比均高于感染不給藥組，第9天時(shí)，感染給“球康”組最高，分別為9.77﹪和7.53﹪，與感染不給藥組差異顯著(P＜0.05)。在CD4+T與CD8+T淋巴細(xì)胞比值方面，感染球蟲組均低于不感染組。感染給“球康”組在接種后的第6天和第9天均高于感染不給藥組，差異不顯著。從CD4+T/CD8+T平均值來看，不感染球蟲組高于感染組，而感染給“球康”組高于感染不給藥組，差異不顯著。其中感染給“球康”組、不感染給“球康”

10、組和不感染不給藥組CD4+T/CD8+T平均值均在2-1之間，分別為1.11、1.33和1.25。而感染不給藥組僅為0.93。 結(jié)論：(1)6個(gè)中藥方劑的抗球蟲指數(shù)均高于感染不給藥組，在一定程度上說明了應(yīng)用中藥防治雞球蟲病是可行的；(2)篩選出的中藥方“球康”300目微粉制劑(2﹪拌料)的抗球蟲指數(shù)達(dá)175.96，高于克球嘉組(500mg/kg拌料)，抗球蟲效果良好；(3)在體外，中藥“球康”能夠顯著抑制球蟲卵囊的孢子過程，對球

11、蟲孢子化卵囊有明顯的抑殺作用；(4)中藥“球康”能夠顯著緩解球蟲感染雞紅細(xì)胞總數(shù)、血紅蛋白含量、紅細(xì)胞壓積、血清總蛋白含量的下降，能夠顯著緩解白細(xì)胞總數(shù)，血清鉀、鈣離子濃度的升高，而對血清鈉、氯和磷離子濃度影響不顯著。中藥“球康”能夠提高球蟲感染雞CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞百分比及CD4+T與CD8+T細(xì)胞的比值，維持機(jī)體免疫水平。在體內(nèi)“球康”造成球蟲的裂殖子和早期小配子發(fā)生異常變化，對球蟲具有抑殺作用。(5)初步認(rèn)為中藥“球康”