炎癥性痛大鼠脊髓后角CRH表達及鞘內(nèi)預注CRH抗傷害性效應(yīng)的實驗研究.pdf

1、目的：本實驗采用福爾馬林炎癥性痛模型觀察在炎癥性痛和痛覺敏化過程中CRH在脊髓后角的表達變化特點；研究CRH鞘內(nèi)預注對福爾馬林誘發(fā)的痛及痛覺敏化時的痛行為學改變和脊髓后角c-fos原癌基因表達的影響，探討鞘內(nèi)預注CRH是否具有抗傷害性效應(yīng)。 方法： 1.福爾馬林炎癥性痛誘導大鼠脊髓后角CRH表達變化 大鼠隨機分為5組(n=6)：Oh對照組、2h組、12h組、24h組、48h組，其中對照組不予任何干預只作正常生理狀

2、態(tài)下空白對照。實驗組動物右足跖部皮下注射5％福爾馬林0.1ml致炎癥性疼痛模型，并于注射后2h、12h、24h、48h分別取L4-5脊髓節(jié)段脊髓進行免疫組織化學方法染色，觀測CRH表達變化。 2.福爾馬林炎癥性痛鞘內(nèi)預注CRH抗傷害性效應(yīng)的實驗研究 采用福爾馬林炎癥性痛模型，大鼠隨機分為7組(n=8)，分別于福爾馬林刺激前10min鞘內(nèi)預注：生理鹽水20μl(NF組)；CRH0.25μg(C1F組)；CRH0.5μg(C

3、2F組)；CRH1.0μg(C3F組)；芬太尼0.25μg(TF組)；CRH0.5μg+芬太尼0.25μg(CTF組)；提前1h腹腔內(nèi)注射CP-154,526(10mg/kg)后鞘內(nèi)給予CRH0.5μg(CPF組)。各組分別在福爾馬林刺激后記錄1h內(nèi)每5min為一時間段的縮腿舔爪時間之和，在15min、30min、60min、120min4個時相點分別檢測熱輻射刺激甩尾反射潛伏期即痛閾的變化，并于2h后檢測脊髓后角原癌基因c-fos的表

4、達產(chǎn)物Fos蛋白的表達情況。 結(jié)果： 1.0h組即在正常生理狀態(tài)下CRH表達為陰性。2h組、12h組、24h組、48h組在福爾馬林刺激后各組脊髓后角神經(jīng)元細胞胞漿CRH染色呈陽性，細顆粒狀，呈棕黃色，胞核不染色，且集中分布在脊髓后角Ⅰ-Ⅱ?qū)?。與Oh組比較，2h組、12h組、24h組、48h組CRH陽性細胞數(shù)目增多、IOD值增加顯著(P＜0.01)。24h組與2h組比較差異明顯，達到高峰。48h組與24h組比較表達明顯減弱

5、，但與24h組比較仍有差異，還沒有恢復至正常狀態(tài)。 2.與NF組比較，C2F組的第二相縮腿舔爪時間明顯縮短(P＜0.05)，CTF組的第一、二相縮腿舔爪縮短最為明顯(P＜0.01)。 3.NF組在福爾馬林刺激后在15、30、60、120min痛閾明顯降低，說明機體處于痛覺敏化狀態(tài)。C2F組抑制痛閾的下降(P＜0.05)，CTF組與C2F組、TF組比較均有差異(P＜0.05)可顯著抑制痛閾的下降。 4.C2F組、T

6、F組和CTF組與NF組比較，F(xiàn)os蛋白免疫陽性細胞數(shù)目和IOD值減少(P＜0.05)，c-fos基因表達被抑制，其中CTF組抑制最為顯著。 5.鞘內(nèi)預注CRH0.25μg、0.5μg、0.1μg，只有0.5μg顯示一定程度的抗傷害性刺激、鎮(zhèn)痛作用。CPF組在縮腿舔爪時間、痛閾和Fos蛋白表達方面均與C2F組差異明顯而與NF組無明顯差異。 結(jié)論： 1.在福爾馬林炎癥性痛及痛覺敏化的過程中，脊髓后角淺層CRH表達呈陽

7、性，強度隨時程遞增，以24h最為顯著達到高峰后逐漸降低。表明CRH作為一種神經(jīng)遞質(zhì)，可能參與脊髓傷害性信息的傳遞與調(diào)制，為進一步研究其對痛覺的調(diào)制作用提供形態(tài)學依據(jù)。 2.鞘內(nèi)預注CRH能抑制福爾馬林大鼠致痛模型第二時相的傷害性行為，抑制痛閾的下降，抑制脊髓后角c-fos基因的表達，阻滯傷害性感受進一步上傳，抑制中樞敏感化，發(fā)揮抗傷害性效應(yīng)，并且這種效應(yīng)不呈劑量依賴性。 3.鞘內(nèi)預注CRH的抗傷害性效應(yīng)可以被全身應(yīng)用CR