連接蛋白Cx43在炎性痛大鼠脊髓背角的表達(dá)及甘珀酸的抗傷害作用.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分 大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎性痛模型的建立及其脊髓背角縫隙連接蛋白Cx43表達(dá)的變化 目的:研究連接蛋白43(Cx43)在佐劑性關(guān)節(jié)炎性痛大鼠脊髓背角的表達(dá)，以探討縫隙連接在炎性痛中的可能作用。 方法: 1、行為學(xué)研究：取成年雄性大鼠20只，隨機(jī)分為2組：CFA模型組和NS生理鹽水組，每組10只。CFA組在大鼠左后肢踝關(guān)節(jié)外側(cè)皮下注射完全弗氏佐劑(CFA)50μl。NS組在大鼠相同部位

2、皮下注射NS 50μl。在注射前1d和注射后2h、4h、8h、1d、3d、5d、7d、10d、14d連續(xù)測(cè)定大鼠雙側(cè)的熱縮足反射潛伏期(PWTL)和機(jī)械縮足反射閾值(PWMT)。 2、形態(tài)學(xué)研究：20只成年雄性大鼠隨機(jī)分為4組：NS對(duì)照組、C2h組、C3d組和C7d組，每組5只。分別在CFA．致炎后相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)取脊髓腰膨大行Cx43免疫組織化學(xué)染色分析，測(cè)定雙側(cè)脊髓背角積分光密度值(IOD)值。 結(jié)果: 1、行為學(xué)

3、研究結(jié)果：?jiǎn)蝹?cè)踝關(guān)節(jié)外側(cè)皮下注射CFA可以在致炎后2h～7d誘導(dǎo)出雙側(cè)的熱痛覺過(guò)敏和機(jī)械性異常痛，雖然以致炎同側(cè)較為顯著(P<0.01)，但是仍呈現(xiàn)明顯的鏡像現(xiàn)象(P<0.01或0.05)。 2、形態(tài)學(xué)研究：CFA致炎后，大鼠脊髓雙側(cè)Cx43的表達(dá)與對(duì)照組相比均顯著增加(P<0.01或0.05)，主要集中于Ⅰ～Ⅱ?qū)雍蚗層，其時(shí)程變化與行為學(xué)變化基本一致。 結(jié)論: 1、CFA誘導(dǎo)的佐劑性關(guān)節(jié)炎性痛模型具有明顯的繼發(fā)

4、性痛敏現(xiàn)象(包括域外痛和鏡像痛)。 2、佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠脊髓雙側(cè)背角Cx43表達(dá)顯著增加，提示星形膠質(zhì)細(xì)胞縫隙連接可能參與佐劑性關(guān)節(jié)炎誘導(dǎo)的病理性疼痛過(guò)程。 第二部分 鞘內(nèi)注射甘珀酸對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的抗傷害作用研究 目的:研究鞘內(nèi)注射縫隙連接阻滯劑一甘珀酸(CBX)對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的抗傷害作用。 方法:所有大鼠均給予L4-5鞘內(nèi)置管，5～7d后保留無(wú)肢體活動(dòng)障礙者。 1、首先研究鞘內(nèi)注射CB

5、X對(duì)正常大鼠雙側(cè)后爪熱縮足反射潛伏期(PWTL)的影響，確定其時(shí)效與量效關(guān)系。32只雄性大鼠隨機(jī)分為4組：NS對(duì)照組、CBX50組、CBX25組和CBX100組(每組8只)，分別鞘內(nèi)注射NS 10μl和CBX 25μg、50μg、100μg。在給藥前0.5h和給藥后0.5h、1～8h(每整點(diǎn))連續(xù)測(cè)定大鼠雙側(cè)PwTL。 2、行為學(xué)研究：成年雄性大鼠40只隨機(jī)平分為五組，建立佐劑性關(guān)節(jié)炎模型，隨機(jī)選擇一組在致炎前0．5h鞘內(nèi)注射C

6、BX 100~g進(jìn)行預(yù)處理，其余四組分別以NS10μl(NS對(duì)照)和CBX 25μg、50μg、10μg的劑量在致炎后0.5h、1d、3d、5d、7d、10d、14d鞘內(nèi)注射，每次給藥后2h測(cè)定雙側(cè)PWTL，并連續(xù)觀測(cè)NS對(duì)照組、CBX100和CBX100μg預(yù)處理組PWTL在致炎第ld的變化。 3、形態(tài)學(xué)研究：15只雄性大鼠隨機(jī)分為3組，每組5只。NS對(duì)照組于大鼠左后肢踝關(guān)節(jié)外側(cè)皮下注射NS 50μl，其它組注射CFA 50μ

7、l；3d后NS對(duì)照組和CFA模型組鞘內(nèi)注射NS 10μl，CBX處理組鞘內(nèi)注射注射CBX 100μg(10μl)。給藥后2h，取脊髓腰膨大行c-Fos免疫組織化學(xué)染色分析并FLIN計(jì)數(shù)。 結(jié)果: 1、CBX可以可逆性、劑量依賴性地提高正常大鼠的輻射熱痛閾(P<0.05或0.01)。在給藥后1h大鼠PWTL痛閾就顯著增加，2h達(dá)到高峰，持續(xù)1-2h后逐漸消退。兩側(cè)無(wú)顯著差異。 2、CBX在炎性痛的不同階段都可以逆轉(zhuǎn)

8、外周CFA誘導(dǎo)的雙側(cè)熱痛覺過(guò)敏(P<0.05或0.01)。致炎前使用CBX預(yù)處理可以在致炎第1天延緩?fù)从X過(guò)敏的出現(xiàn)(P<0.01)。 3、單側(cè)踝關(guān)節(jié)外側(cè)皮下CFA致炎后第3天，大鼠腰段脊髓雙側(cè)背角c-Fos蛋白表達(dá)顯著增加，表現(xiàn)為致炎后FLI神經(jīng)元數(shù)量增加和體積增大。而給予甘珀酸處理，可以逆轉(zhuǎn)這種改變，與CFA組比較，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 結(jié)論:作為縫隙連接阻滯劑的甘珀酸對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎誘導(dǎo)的病理性