36例骨髓增生異常綜合征患者SF3B1檢測突變及其與臨床特征間的相關研究.pdf

1、目的：
　　 骨髓增生異常綜合征(MDS)是一種造血干細胞克隆性疾病,其形態(tài)和臨床過程有顯著的異質性1。為了解其復雜的發(fā)病機制,MDS的分子生物學改變是其研究的重點。近年來已發(fā)現(xiàn)MDS患者存在某些基因異常,如TET2,ASXL1,EZH2,IDH1,DNMT3A,TEL/ETV6,RUNX1和TP532。這些基因突變可能參與了MDS的發(fā)生,并為疾病的診斷、預后分析及靶向治療提供依據(jù)3,4。最近有報道應用下一代測序方法(nextg

2、enerationsequencing)鑒定出MDS患者存在剪接因子3b亞單位1(SF381)基因突變,突變率約20.3%5-7。并且該突變的發(fā)生與MDS的一個典型指征即骨髓中出現(xiàn)環(huán)形鐵粒幼紅細胞(RS)有密切相關性,即近65%的存在RS的MDS患者發(fā)生SF3B1突變5。SF381位于染色體2q33.1上,編碼U2小核核糖核蛋白復合體(U2snRNP)的核心成分。U2snRNP位于剪接體的催化部位,參與mRNA前體剪接加工而形成成熟的m

3、RNA,從而調節(jié)剪接變異的多樣性8。
　　 到目前為止,國內尚未見關于SF3B1突變研究的文獻報道,本實驗通過建立可行的等位基因特異性PCR(AS-PCR)檢測技術,分別檢測了36例MDS患者SF381基因的13-15號外顯子,并對SF3B1基因突變與MDS分型、臨床特點之間的相關性及預后意義進行了分析。
　　 方法：
　　 通過AS-PCR擴增產(chǎn)物后測序的方法,檢測36例MDS患者SF381基因的13-15號外

4、顯子中的突變發(fā)生情況。36例初診MDS患者骨髓標本來自2011年2月至2012年1月我院門診及住院患者。按照2001年世界衛(wèi)生組織(WHO)分型診斷標準,RA型6例,RARS型4例,RCMD型7例,RAEB-Ⅰ型8例,RAEB-Ⅱ型11例。10名正常對照為我院門診確診無血液病患者。
　　 主要研究方法為:(1)采集患者及對照者骨髓2ml,紅細胞裂解液分離單個核細胞,運用基因組DNA抽提試劑盒進行DNA的抽提;(2)采用等位基因特

5、異性PCR技術(AS-PCR)擴增SF3B1基因,擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳,所有出現(xiàn)目的條帶患者PCR產(chǎn)物進行測序,對比正常SF3B1基因從而發(fā)現(xiàn)突變異常。(3)通過統(tǒng)計學分析SF3B1突變與部分臨床參數(shù)間的相關性。
　　 結果：
　　 1.36例MDS患者中檢測到5例SF381突變,該突變在MDS患者中的發(fā)生率為13.9%。突變型MDS患者中RARS型2例(4:2),RA型0例,RAE-Ⅰ型0例,RAEB-Ⅱ型1例(

6、11:1),RCMD型2例(7:1)。標本4、5、25、28、34號在第14號外顯子出現(xiàn)第2098位堿基上A-G突變,為賴氨酸轉變?yōu)楣劝彼?K700E)。標本35號在第15號外顯子出現(xiàn)第2169位堿基上T-G突變,沒有發(fā)生氨基酸變化,無功能蛋白的改變,歸為突變陰性組。10例正常對照無一例突變陽性。
　　 2.5例SF381基因突變型與31例野生型之間在一般臨床特征上差異有統(tǒng)計學意義,如骨髓原始細胞計數(shù)(P=0.041)、外周血白

7、細胞計數(shù)(P=0.006)、血小板計數(shù)(P=0.006)。MDS各亞型間SF3Bl突變差異無統(tǒng)計學意義(P=0.088),可能與樣本量小有關。有1例發(fā)生突變的標本染色體為復雜核型,1例標本在MDS進展至M2b后未檢測出SF3B1基因突變,因標本例數(shù)較少,尚不能分析此突變與MDS發(fā)生染色體變化及轉白之間的關系。
　　 結論：
　　 1.本實驗檢測出在MDS患者中存在SF3B1突變,突變率低于國外相關報道。
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