WT1基因在骨髓增生異常綜合征患者中的表達(dá)研究.pdf

1、目的1.利用FQ-RT-PCR檢測(cè)RA、RAEB、RAEBt的WT1表達(dá)水平的變化；2.通過(guò)回顧性分析，觀察RA患者發(fā)病初期的WT1表達(dá)情況；3.在個(gè)體化水平觀察MDS患者從RA演變到RAEB、RAEBt甚至白血病時(shí)，WT1表達(dá)水平的變化。探討WT1基因在MDS診斷和預(yù)后判斷中的意義。 方法1.回顧性分析山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院從2000年至2003年的病例。按FAB標(biāo)準(zhǔn)選取MDS患者45例。其中男24例、女21例、中位年齡43歲，

2、包括RA患者18例、RAEB16例、RAEBt11例；18例RA中，有13例回顧診斷的RA，未經(jīng)過(guò)治療；儲(chǔ)存三年以上的正常人骨髓涂片10例作為對(duì)照，其中男3例，女7例，中位年齡40歲；按照WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)RA重新分型，6例難治性貧血(WHO-RA)、12例難治性血細(xì)胞減少伴有多系發(fā)育異常(RCMD)。2.采用骨髓涂片提取RNA，通過(guò)熒光定量RT-PCR方法，對(duì)其WT1表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，以β-actin表達(dá)作為內(nèi)對(duì)照，WT1/β-acti

3、n比值作為WT1的相對(duì)表達(dá)量。3.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用spss軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果1.正常人骨髓涂片WT1的相對(duì)表達(dá)量為2.75×10-6±20.0，RA組為3.87×10-5±30.2，RAEB組為1.06×10-3±4.707，RAEBt組為1.35×10-2±6.100，兩兩相比有顯著性差異，且WT1基因的表達(dá)水平與MDS病人的疾病進(jìn)展呈正相關(guān)關(guān)系。2.WT1與MDS患者的原始細(xì)胞百分?jǐn)?shù)之間有顯著相關(guān)性(Spearman's相

4、關(guān)分析，r=0.64)。3.回顧診斷的RA，其WT1表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組。4.回顧分析RA的疾病進(jìn)展過(guò)程，半年內(nèi)發(fā)展為RAEB/RAEBt的RA患者，其WT1表達(dá)明顯高于半年內(nèi)病情穩(wěn)定的RA患者；同一患者從RA發(fā)展到RAEB時(shí)，WT1表達(dá)水平增長(zhǎng)一個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)以上；在RA期間，WT1表達(dá)水平的波動(dòng)小于一個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)。5.WHO分型中，RCMD組的WT1轉(zhuǎn)錄水平(1.73×10-4)明顯高于WHO-RA(1.92×10-6，P＜0.05)。

5、 結(jié)論1.儲(chǔ)存骨髓涂片可以提取RNA，通過(guò)熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)WT1基因，為疾病的回顧性研究提供了新的檢測(cè)方法。2.WT1基因可作為MDS疾病進(jìn)程的標(biāo)志物。3.對(duì)形態(tài)學(xué)未明確診斷而臨床高度懷疑MDS的患者，若WTI表達(dá)水平比正常對(duì)照平均值高兩個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)提示可能診斷為RA：對(duì)RA患者，若WT1表達(dá)水平＞1個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)的上升提示MDS近期內(nèi)可能發(fā)生疾病進(jìn)展。由于例數(shù)有限，尚有待進(jìn)一步證實(shí)。4.WHO分型中，RCMD與WHO-RA的