北五味子木脂素研究及其HPLC指紋圖譜的建立.pdf

1、本文以深入有效地開發(fā)利用北五味子資源、系統(tǒng)的研究北五味子化學(xué)成分為目的，以常規(guī)方法結(jié)合現(xiàn)代植物化學(xué)分離手段，建立北五味子提取工藝；在此基礎(chǔ)上，對其部分化學(xué)成分分離及結(jié)構(gòu)鑒定進行研究，進而建立北五味子HPLC指紋圖譜。為北五味子資源的高效開發(fā)及可持續(xù)利用奠定理論及方法學(xué)基礎(chǔ)。為此，開展本項研究并取得了如下進展： 1.以乙醇為溶劑，以不同濃度的溶劑、料液比(V/V)、超聲清洗時間為因素，進行L9(34)因素、水平正交設(shè)計，確定以95

2、﹪乙醇為溶劑、料液比1∶8、超聲清洗70min可獲得較高的得膏率和總木脂素提取率。 2.采用超臨界流體CO2萃取(SFE-CO2)技術(shù)，應(yīng)用L9(34)正交試驗的方法，固定藥材粉碎度30～40目、CO2流量為10Kg/h、藥材投料量(堆密度)360g/罐，以萃取壓力、萃取溫度、萃取時間為因素，取三水平，用L9(34)正交試驗表布置實驗，建立北味子SFE-CO2提取工藝。 3.首次采用超臨界流體CO2萃取(SFE-CO2)

3、，結(jié)合常壓硅膠柱層析，建立以石油醚-乙酸乙酯為梯度變化洗脫模式，以200～300目硅膠為固定相，于石油醚—乙酸乙脂60∶1(V/V)流分得化合物(1)和組分(Ⅰ)。組分(Ⅰ)再以300～400目硅膠為固定相，分別于石油醚—乙酸乙脂40∶1、20∶1流分中得化合物(2)和(3)，以上三組化合物分別以石油醚-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上相或甲苯-乙酸乙酯(9∶7)為展開劑，以五味子甲素和乙素為對照品，于薄層層析板中上行展開，確定化合物

4、(2)、(3)分別為五味子乙素和五味子甲素；以HypersilODS25um(4.6mm×250mm)；流動相水(A)，甲醇(B)，梯度洗脫，0-4min,70﹪B；4-54min,70﹪-100﹪B；檢測波長254nm；流速1mL/min；柱溫35℃；進樣量3ul。通過峰面積，測得化合物(1)純度為98.96﹪、化合物(2)純度為98.32﹪、化合物(3)純度為97.85﹪。 4.首次應(yīng)用高速逆流色譜HSCCC-1000分離制

5、備五味子甲素和乙素，以溶劑系統(tǒng)正已烷-甲醇-水-乙腈(10∶5∶4∶3)的上相為固定相，下相為流動相，流速2ml/min，轉(zhuǎn)速900r/min，從北五味子(Schisandrachinensis(Turcz.)Baill)中分離制備五味子乙素(SchisandrinB)；正已烷-甲醇-水(6∶7∶5)的上相為固定相，下相為流動相，流速2ml/min，轉(zhuǎn)速920r/min，分離制備五味子甲素(Deoxyschisandrin)。經(jīng)HPLC

6、純度檢測，測得五味子甲素純度為94.56﹪，五味子乙索純度為98.56﹪。 5.首次結(jié)合超臨界流體CO2(SFE-CO2)萃取工藝，建立北五味子HPLC指紋圖譜。 本文創(chuàng)新點： 1.首次采用超臨界流體CO2萃取(SFE-CO2)，結(jié)合常壓硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯為梯度變化洗脫模式，分離五味子甲素、乙素和丙素。 2.首次應(yīng)用高速逆流色譜技術(shù)分離制備五味子甲素和乙素。 3.首次結(jié)合超臨界流體(S