北五味子體細(xì)胞胚發(fā)生的研究.pdf

1、北五味子是傳統(tǒng)中藥材，近年來(lái)在制藥、食品和飲料等工業(yè)中的需求不斷增加。但是，盲目的開采使野生北五味子急劇減少；選育出的北五味子無(wú)性系新品種，也因?yàn)闆](méi)有成熟的無(wú)性繁殖體系而得不到推廣。通過(guò)體細(xì)胞胚發(fā)生快速繁殖再生植株是有效的解決擴(kuò)大北五味子資源量的措施之一，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。本文對(duì)北五味子的體細(xì)胞胚發(fā)生進(jìn)行了研究，為實(shí)現(xiàn)北五味子的快速繁殖、種質(zhì)保存打下基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下： 以北五味子種子發(fā)芽后的子葉和下胚軸為實(shí)驗(yàn)材料，進(jìn)行體細(xì)胞

2、胚發(fā)生研究，結(jié)果表明：培養(yǎng)溫度為30℃，以下胚軸為外植體，2,4-D濃度為4.0 mg/L時(shí)，胚性愈傷組織誘導(dǎo)率最高，為18.3％；添加0.5 mg/LBA或2％蔗糖的1/3 MS培養(yǎng)基中形成的體細(xì)胞胚數(shù)量較多，3 mg胚性愈傷組織最多可產(chǎn)生349個(gè)體細(xì)胞胚；添加2％蔗糖的1/3MS培養(yǎng)基適合于體細(xì)胞胚的萌發(fā)和形成再生植株，發(fā)芽數(shù)和植株再生數(shù)分別為63個(gè)和一．9個(gè)；再生植株移栽成活率為95％。 以北五味子的優(yōu)良品種“紅珍珠”冬芽

3、為外植體，在添加4.0 mg/L2,4-D的MS培養(yǎng)基上可誘導(dǎo)出體細(xì)胞胚；25℃，GA<,3>濃度為1.0 mg/L，處理10 d可促進(jìn)體細(xì)胞胚的形成、萌發(fā)和植株再生；4℃低溫處理對(duì)于形成的體細(xì)胞胚數(shù)量影響顯著，但是對(duì)體細(xì)胞胚萌發(fā)和植株再生卻沒(méi)有顯著影響。對(duì)子葉階段的畸形體細(xì)胞胚進(jìn)行組織解剖學(xué)觀察，認(rèn)為筒形胚的頂端分生組織缺失，可能是導(dǎo)致其不能正常發(fā)育的主要原因。對(duì)北五味子“紅珍珠”的體細(xì)胞胚形成的再生植株進(jìn)行RAPD分析，結(jié)果表明，體

4、細(xì)胞胚再生植株遺傳上較穩(wěn)定。30℃有利于添加2,4-D的培養(yǎng)基中體細(xì)胞胚直接誘導(dǎo)次生胚發(fā)生。 對(duì)北五味子胚性細(xì)胞進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，添加1.0 mg/L2,4-D的MS液體培養(yǎng)基中，初始濃度為30 mL液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)30 mg(鮮重)細(xì)胞可大量增殖，并具有很好的分散性。1/3 MS液體培養(yǎng)基有利于體細(xì)胞胚的發(fā)育和成熟，每30 mL懸浮培養(yǎng)的胚性細(xì)胞可產(chǎn)生大約3 400個(gè)體細(xì)胞胚。將子葉形胚轉(zhuǎn)至不添加植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的1/2 MS半固