乳腺癌微衛(wèi)星不穩(wěn)定性和DNA錯(cuò)配修復(fù)基因突變的研究.pdf

1、目的：通過(guò)研究乳腺癌中微衛(wèi)星不穩(wěn)定性和DNA錯(cuò)配修復(fù)基因hMSH2的突變情況，從hMSH2外顯子突變致錯(cuò)配修復(fù)功能缺失影響細(xì)胞遺傳穩(wěn)定穩(wěn)定性的角度探討乳腺癌中MSI發(fā)生的可能機(jī)制，尋找更有效的分子標(biāo)志，為乳腺癌的發(fā)生及預(yù)后評(píng)估提供理論依據(jù)。 方法：收集廣西區(qū)腫瘤醫(yī)院2004年至2008年的18例遠(yuǎn)離癌組織的乳腺組織，39例乳腺良性腫瘤組織和78例乳腺癌組織，用免疫組化方法測(cè)定所有標(biāo)本hMSH2蛋白的表達(dá)情況。每例標(biāo)本用DNA提取

2、試劑盒提取DNA，針對(duì)hMSH2基因的16個(gè)外顯子的堿基序列特征，有目的地設(shè)計(jì)有助于篩查基因堿基突變的PCR引物，每一例標(biāo)本的DNA用PCR擴(kuò)增hMSH2基因的16個(gè)外顯子。分別將每一例外顯子的PCR產(chǎn)物進(jìn)行SSCP分析，對(duì)泳動(dòng)變位或出現(xiàn)異常區(qū)帶的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序。參考文獻(xiàn)選取D2S443、D11S988、D21S1436、D3S1766、D2S2739這5個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)，在基因庫(kù)中查出相應(yīng)的引物序列，用PCR擴(kuò)增后用12％聚

3、丙烯酰胺凝膠電泳，銀染顯色后進(jìn)行分析。所有數(shù)據(jù)均使用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，分類資料采用卡方檢驗(yàn)，等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)，多變量數(shù)據(jù)采用Logistic回歸分析。所有P值使用雙側(cè)檢驗(yàn)。 結(jié)果：①18例遠(yuǎn)離癌組織的乳腺組織hMSH2的陽(yáng)性表達(dá)率為94.44％(17/18)，39例乳腺良性腫物的hMSH2陽(yáng)性表達(dá)率為76.92％(30/39)，78例乳腺癌的hMSH2陽(yáng)性表達(dá)率為39.74％(31/78)，三組比較差別均有

4、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=29.383，p=0.000)。乳腺癌中hMSH2的表達(dá)率明顯減少。②Lgostici回歸分析發(fā)現(xiàn)hMSH2的表達(dá)與乳腺癌臨床因素中的腫物大小、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(guān)。在腫物較大、有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期較晚的乳腺癌病例中更容易觀察到hMSH的表達(dá)減少。③18例遠(yuǎn)離癌組織的乳腺組織未見(jiàn)hMSH2基因的突變，39例乳腺良性腫物組織中有1例檢測(cè)出hMSH2基因的第7外顯子突變(409C→G)，78例乳腺癌組織中有9

5、例檢測(cè)出hMSH2基因的突變，分別是外顯子6(322G→A，2例)、外顯子7(378A→T)、外顯子12(623C→G)、外顯子12(631A→G，同義突變)、外顯子13(727T→G)、外顯子14(796A→C，2例同義突變)、外顯子14(801A→G)?？偼蛔兟蕿?1.54％(9/78)，三組比較差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=4.332，p=0.037)。在乳腺癌組織中更容易觀察到hMSH2的突變。④18例遠(yuǎn)離癌組織的乳腺組織未見(jiàn)MSI

6、發(fā)生，39例乳腺良性腫物組織中有5例至少1個(gè)位點(diǎn)發(fā)生MSI，MSI的發(fā)生率為12.82％(5/39)。78例乳腺癌中有35例至少1個(gè)位點(diǎn)出現(xiàn)MSI，MSI的發(fā)生率為44.87％(35/78)，三組比較差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=20.365，p=0.000)，乳腺癌組織中更容易發(fā)生MSI。⑤Lgostici回歸分析發(fā)現(xiàn)MSI與乳腺癌hMSH2的表達(dá)和臨床因素中的臨床分期、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。在臨床分期晚及有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例更多的發(fā)現(xiàn)M

7、SI。⑥關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)hMSH2突變與蛋白表達(dá)減少有關(guān)(x2=6.624，p=0.01)，與MSI的發(fā)生有關(guān)(x2=10.572，p=0.01)。hMSH2蛋白表達(dá)與MSI發(fā)生有關(guān)(x2=7.463，p=0.006)。9例hMSH2突變的病例均有hMSH2蛋白的表達(dá)缺失及MSI的發(fā)生。 結(jié)論：①hMSH2在遠(yuǎn)離癌的乳腺組織中高表達(dá)，在乳腺良性腫物中表達(dá)下降，而在乳腺癌中表達(dá)率更低。hMSH2的表達(dá)缺失與乳腺癌的腫物較大、腋窩淋巴結(jié)

8、轉(zhuǎn)移及臨床分期晚有關(guān)，提示hMSH2蛋白有可能作為乳腺癌判斷預(yù)后的一個(gè)分子標(biāo)志。②hMSH2基因在乳腺癌中無(wú)明顯突變熱點(diǎn)，突變分散于第6，7，12，13，14外顯子，總突變率為11.54％。③乳腺癌中普遍存在著MSI，并與乳腺癌的臨床分期和腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示MSI可能作為判斷乳腺癌臨床分期的一個(gè)分子標(biāo)志，可能對(duì)推測(cè)預(yù)后提供幫助。④hMSH2基因的突變導(dǎo)致有功能的hMSH2蛋白缺失，進(jìn)而有可能影響MMR系統(tǒng)的功能，從而可能導(dǎo)致產(chǎn)生微