玉米標(biāo)準(zhǔn)DNA指紋庫(kù)構(gòu)建方案在多作物中的通用性研究.pdf

1、隨著我國(guó)主要農(nóng)作物利用SSR分子標(biāo)記法進(jìn)行品種鑒定技術(shù)規(guī)程相繼頒布，如:玉米(NY/T1432-2014)、小麥(NY/T2470-2013)、水稻(NY/T1433-2014)、高粱(NY/T2467-2013)、大豆(NY/T2595-2014)等，基于各個(gè)作物行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的DNA指紋庫(kù)構(gòu)建工作也在不斷開(kāi)展起來(lái)，其中玉米在基于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上建立了標(biāo)準(zhǔn)DNA指紋圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)，并形成一套成熟體系，為其他作物建庫(kù)提供了參考依據(jù)。作物特點(diǎn)直接影

2、響建庫(kù)方案，建庫(kù)的難易程度也不盡相同，為了盡快發(fā)揮主要農(nóng)作物品種DNA指紋圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)在農(nóng)作物品種鑒定中的作用，需要尋求一種通用、簡(jiǎn)單、便捷的建庫(kù)方案。本研究主要對(duì)玉米（Zea mays Linn.Sp.）、高粱[Sorghum bicolor(L.)]、大豆[Glycine max(Linn.)]、小麥（TriticumaestivumLinn.）4種主要農(nóng)作物進(jìn)行品種DNA指紋圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建的通用性方案進(jìn)行探索研究，主要研究結(jié)果如下:

3、
　　1.以166份高粱和6份玉米標(biāo)準(zhǔn)品種為例，對(duì)比兩種作物建庫(kù)方案存在的異同，并通過(guò)對(duì)兩種作物建庫(kù)方案驗(yàn)證發(fā)現(xiàn):玉米品種標(biāo)準(zhǔn)DNA指紋庫(kù)的建庫(kù)方案表現(xiàn)出更為穩(wěn)定、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，并且高粱建庫(kù)能夠完全適用該方案。因此，在玉米標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上建立了166份高粱品種DNA指紋圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)，并通過(guò)疑似篩查確定疑似樣品名單，進(jìn)一步在田間進(jìn)行表型鑒定。通過(guò)一年田間試驗(yàn)測(cè)試，結(jié)果表明田間表型鑒定結(jié)果和室內(nèi)檢測(cè)結(jié)果基本一致，進(jìn)一步說(shuō)明玉米標(biāo)準(zhǔn)DNA

4、指紋庫(kù)構(gòu)建方案在跨作物高粱DNA指紋庫(kù)構(gòu)建中可以應(yīng)用，也為其他作物開(kāi)展通用性建庫(kù)方案的探索奠定了基礎(chǔ)。
　　2.以5份大豆品種為例，探索玉米DNA指紋庫(kù)構(gòu)建方案在大豆中的通用性。通過(guò)整個(gè)試驗(yàn)流程的對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)大豆基本可以適用玉米標(biāo)準(zhǔn)DNA指紋庫(kù)的構(gòu)建方案。在建立通用性建庫(kù)方案的過(guò)程中，最主要的問(wèn)題一是樣品處理方式，二是引物退火溫度存在不統(tǒng)一的現(xiàn)象，使得建立通用的PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)程序相對(duì)較為困難。但對(duì)于其他建庫(kù)環(huán)節(jié)可以和玉米標(biāo)

5、準(zhǔn)DNA指紋庫(kù)構(gòu)建方案上通用，如在數(shù)據(jù)分析上由于大豆一般屬于二倍體自花授粉作物，帶型相對(duì)簡(jiǎn)單，在采用玉米數(shù)據(jù)分析參數(shù)時(shí)得到的效果較好，易于實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)的自動(dòng)化分析。
　　3.以5份小麥為例，探索玉米標(biāo)準(zhǔn)DNA指紋庫(kù)構(gòu)建方案在小麥中的通用性。通過(guò)整個(gè)試驗(yàn)流程的對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)小麥基本可以適用玉米標(biāo)準(zhǔn)DNA指紋庫(kù)的構(gòu)建方案。通用性建庫(kù)中存在的主要問(wèn)題是引物的問(wèn)題，小麥屬于異源六倍體，本身峰型較為復(fù)雜，在數(shù)據(jù)分析環(huán)節(jié)采用二倍體的數(shù)據(jù)分析參數(shù)時(shí)