泄?jié)峤舛痉綄冃越Y(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜TLR2基因、蛋白表達(dá)及血清IL-1β、IL-4的影響.pdf

1、目的：潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis，UC)是一種慢性非特異性結(jié)腸炎癥，病程漫長，病情輕重不一，常反復(fù)發(fā)作，與結(jié)腸癌發(fā)病有關(guān)，被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治病之一。我們根據(jù)中醫(yī)“濁毒”理論，在長期臨床實(shí)踐中，篩選出經(jīng)驗(yàn)方泄?jié)峤舛痉剑孕節(jié)嵘?、解毒祛瘀為大法論治本病，?yàn)之臨床療效可靠。本研究在以往工作基礎(chǔ)上，對泄?jié)峤舛痉街委烾C進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)研究，觀察探討UC發(fā)病機(jī)制、物質(zhì)基礎(chǔ)及泄?jié)峤舛痉街委烾C機(jī)制，為進(jìn)一步進(jìn)行臨床研究

2、打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　 方法：本研究取健康清潔級wistar大鼠40只，雌雄各半，體重250克，隨機(jī)分成5組，每組8只：空白對照組(BK)、模型對照組(MK)、柳氮磺吡啶組(LK)、中藥高劑量組(GK)、中藥低劑量組(DK)。采用三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇聯(lián)合造模法誘導(dǎo)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎動物模型，造模后第3天，BK大鼠正常喂養(yǎng)，MK大鼠每日用生理鹽水灌胃，LK大鼠予柳氮磺胺吡啶(SASP)灌胃，GK、DK分別予泄?jié)峤舛痉礁邉┝?/p>

3、、低劑量進(jìn)行灌胃治療，持續(xù)14天。實(shí)驗(yàn)分3個(gè)方面研究探討：實(shí)驗(yàn)一，觀察泄?jié)峤舛痉綄冃越Y(jié)腸炎大鼠一般狀態(tài)及結(jié)腸組織病理學(xué)的影響；實(shí)驗(yàn)二，觀察泄?jié)峤舛痉綄冃越Y(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜TLR2基因、蛋白表達(dá)的影響；實(shí)驗(yàn)三，觀察泄?jié)峤舛痉綄冃越Y(jié)腸炎大鼠血清IL-1β、IL-4的影響。采用spss17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。通過以上動物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步觀察本方療效，探討其治療潰瘍性結(jié)腸炎的可能作用機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 1實(shí)驗(yàn)一泄

4、濁解毒方對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠一般狀態(tài)及結(jié)腸組織病理學(xué)的影響
　　 1.1大鼠的一般狀態(tài)及疾病活動指數(shù)(DAI)
　　 與BK相比，其他各組大鼠的精神狀態(tài)、體重、活動情況、毛發(fā)光澤度、食欲、大便性狀等均有不同程度改變，經(jīng)過藥物干預(yù)后，GK大鼠喜活動，反應(yīng)靈敏，體重增加明顯，食量較多，大便成顆粒狀，一周后毛色出現(xiàn)光澤柔潤，一般狀態(tài)優(yōu)于其他治療組，接近正常組。
　　 BK(0.376±0.098)大鼠DAI評分未見明顯增

5、高，MK(2.103±0.306)大鼠DAI評分顯著增高，兩組相比有非常顯著差異性(P＜0.01)。GK(0.437±0.125)、DK(1.332±0.141)、LK(1.285±0.234)與MK(2.103±0.306)相比大鼠DAI評分明顯降低，均有非常顯著性差異(P＜0.01)。與LK相比，GK大鼠DAI評分明顯降低，有非常顯著性差異(P＜0.01)；DK大鼠DAI評分無顯著性差異(P＞0.05)。GK、DK之間進(jìn)行比較，大鼠

6、DAI評分GK明顯低于DK，有非常顯著性差異(P＜0.01)。1.2大鼠結(jié)腸的大體觀察及黏膜損傷指數(shù)(CMDI)
　　 與BK組相比，其他各組大鼠結(jié)腸均有色澤、皺襞完整度、厚度的改變，并出現(xiàn)充血、水腫、潰瘍等病理表現(xiàn)。經(jīng)過藥物干預(yù)后，GK組大鼠的結(jié)腸擴(kuò)張不明顯，管壁不厚，腸管表面顏色變化不明顯，未見糜爛及明顯潰瘍，可見潰瘍愈合的瘢痕，情況優(yōu)于其他治療組。
　　 BK(0.463±0.122)大鼠CMDI評分較低，MK(2

7、.620±0.458)大鼠CMDI評分顯著增高，兩組相比有顯著差異性(P＜0.01)。GK(0.478±0.133)、DK(1.554±0.101)、LK(1.514±0.173)與MK(2.103±0.306)相比大鼠CMDI評分明顯降低，均有非常顯著性差異(P＜0.01)。與LK相比，GK大鼠CMDI評分明顯降低，有非常顯著性差異(P＜0.01)；DK大鼠CMDI評分無顯著性差異(P＞0.05)。GK、DK之間進(jìn)行比較，大鼠CMDI

8、評分GK明顯低于DK，有非常顯著性差異(P＜0.01)。1.3光鏡下大鼠結(jié)腸病理組織形態(tài)學(xué)觀察及病變分級
　　 MK大鼠造模后3天，可見水腫、壞死、潰瘍形成、炎性滲出、黏膜層缺失等變化。經(jīng)藥物干預(yù)后，GK大鼠結(jié)腸基本形態(tài)與BK相似，間質(zhì)充血水腫不明顯，散見少量炎性細(xì)胞，黏膜上皮及腺管排列整齊，杯狀細(xì)胞豐富。
　　 光鏡下觀察BK(1.625±0.744)大鼠病理分級評分較低，MK(4.250±0.707)大鼠病理分級評分

9、顯著增高，兩組相比有顯著差異性(P＜0.01)。GK(3.250±0.707)、DK(2.375±0.744)、LK(3.125±0.641)與MK相比大鼠病理分級評分明顯降低，均有非常顯著性差異(P＜0.01)。與LK相比，GK大鼠病理分級評分明顯降低，有非常顯著性差異(P＜0.01)；DK大鼠病理分級評分無顯著性差異(P＞0.05)。GK、DK之間進(jìn)行比較，大鼠病理分級評分GK明顯低于DK，有非常顯著性差異(P＜0.01)。

10、　　 2實(shí)驗(yàn)二泄?jié)峤舛痉綄冃越Y(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜TLR2基因、蛋白表達(dá)的影響
　　 2.1 RT-PCR測定大鼠結(jié)腸黏膜TLR2的基因表達(dá)BK（0.070±0.002）大鼠TLR2mRNA表達(dá)很少，MK（0.414±0.006）大鼠TLR2mRNA表達(dá)明顯增高，兩組相比有顯著差異性(P＜0.01)。與MK相比GK(0.253±0.019)、DK(0.326±0.038)、LK(0.282±0.228)大鼠TLR2mRNA表達(dá)

11、明顯降低，有非常顯著差異性(P＜0.01)。與LK相比較，GK大鼠TLR2mRNA表達(dá)明顯降低，有非常顯著差異性(P＜0.01)；DK大鼠TLR2mRNA表達(dá)降低，有顯著差異性(P＜0.05)。GK與DK相比較，GK大鼠TLR2mRNA表達(dá)明顯降低，有非常顯著差異性(P＜0.01)。2.2免疫組化法測定大鼠結(jié)腸黏膜TLR2的蛋白表達(dá)
　　 BK（8.811±1.808）大鼠TLR2蛋白表達(dá)很少，MK(51.535±2.911)大

12、鼠TLR2蛋白表達(dá)明顯增高，兩組相比有顯著差異性(P＜0.01)。與MK相比GK(16.728±1.439)、DK(34.013±2.414)、LK(34.941±2.308)大鼠TLR2蛋白表達(dá)明顯降低，有非常顯著差異性(P＜0.01)。與LK相比較，DK大鼠TLR2蛋白表達(dá)無顯著差異性(P＞0.05)；GK大鼠TLR2蛋白表達(dá)降低，有顯著差異性(p＜0.01)。GK與DK相比較，GK大鼠TLR2蛋白表達(dá)明顯降低，有非常顯著差異性(P

13、＜0.01)。
　　 3實(shí)驗(yàn)三泄?jié)峤舛痉綄冃越Y(jié)腸炎大鼠血清IL-1β、IL-4表達(dá)的影響
　　 3.1放免法觀察大鼠血清IL-1β水平
　　 BK（0.086±0.030）大鼠血清中IL-1β含量很低，MK(0.209±0.050)大鼠血清中IL-1β含量明顯增高，兩組相比有顯著差異性(P＜0.01)。與MK相比GK(0.082±0.013)、DK(0.137±0.029)、LK(0.128±0.041)大鼠

14、血清中IL-1β明顯降低，有非常顯著差異性(P＜0.01)。與LK相比較，DK大鼠血清中IL-1β無顯著差異性(P＞0.05)；GK大鼠血清中IL-1β降低，有顯著差異性(p＜0.05)。GK與DK相比較，GK大鼠血清中IL-1β明顯降低，有非常顯著差異性(P＜0.01)。3.2放免法觀察大鼠血清IL-4水平
　　 BK（1.163±0.263）大鼠血清中IL-4含量較高，MK（0.443±0.142）大鼠血清中IL-4含量明顯

15、降低，兩組相比有顯著差異性(P＜0.01)。與MK相比GK（1.024±0.177）、LK（0.892±0.153）大鼠血清中IL-4明顯升高，有非常顯著差異性(P＜0.01)；DK（0.688±0.212）大鼠血清中IL-4亦升高，有顯著差異性(P＜0.05)。LK與GK相比較，大鼠血清中IL-4無顯著差異性(P＞0.05):LK與相比較DK，大鼠血清中IL-4明顯升高，有顯著差異性(P＜0.05)。GK與DK相比較，GK大鼠血清中I