泄?jié)峤舛痉綄?duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠TLR4、MD2及IL13的影響.pdf

1、目的:潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis，UC)是一種結(jié)腸慢性非特異性炎癥疾病，其病程長(zhǎng)，病因復(fù)雜，病情輕重不一，常反復(fù)發(fā)作，治愈難度大，并與結(jié)腸癌的發(fā)病有相關(guān)性。近年來(lái)，潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病率不斷增加，引起了廣泛重視。我們依據(jù)“濁毒”理論，通過(guò)長(zhǎng)期大量的臨床實(shí)踐，篩選總結(jié)出經(jīng)驗(yàn)方，名為泄?jié)峤舛痉?，本方治療UC以泄?jié)嵘?、解毒祛瘀為大法，?jīng)臨床驗(yàn)證療效可靠。此次研究以以往工作為基礎(chǔ)，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，觀(guān)察泄?jié)峤舛痉綄?duì)UC大鼠血

2、清中IL-13、TLR4及MD2的影響，探討UC發(fā)病機(jī)制及解毒泄?jié)岱剿帉?duì)UC治療的可能作用機(jī)理，為更深入的臨床研究打下基礎(chǔ)。
　　方法:本研究取健康清潔級(jí)wistar大鼠45只，雄性，體重220-250g，隨機(jī)抽取8只作為空白組(BK)，其余大鼠予以三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇聯(lián)合造模法誘導(dǎo)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的動(dòng)物模型。此法造模后第3天，隨機(jī)處死5只造模大鼠，檢查其結(jié)腸標(biāo)本，確認(rèn)有充血、水腫、潰瘍形成等病理變化。造模成功后將剩余大

3、鼠隨機(jī)分成4組:模型對(duì)照組(MK)、中藥高劑量組(GK)、中藥低劑量組(DK)、柳氮磺吡啶組(LK)，每組8只。BK大鼠正常喂養(yǎng)，MK組大鼠每日用生理鹽水灌胃，LK組大鼠予柳氮磺胺吡啶(SASP)灌胃，GK組大鼠予泄?jié)峤舛痉礁邉┝抗辔?，DK組大鼠予泄?jié)峤舛痉降蛣┝抗辔福掷m(xù)治療14天。
　　實(shí)驗(yàn)分3個(gè)方面研究探討:觀(guān)察大鼠精神狀態(tài)、體重、大便性狀等一般情況變化;評(píng)價(jià)大鼠結(jié)腸黏膜損傷程度;采用免疫組化法檢測(cè)各組大鼠血清中IL-13、

4、TLR4及MD2的表達(dá)。依據(jù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步觀(guān)察本方對(duì)UC大鼠血清中IL-13、TLR4及MD2的影響，分析其治療潰瘍性結(jié)腸炎的可能作用機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1一般情況:與BK組相比，其他各組大鼠一般狀況均有不同程度改變。其中GK組大鼠大便成顆粒狀、反應(yīng)靈敏、喜活動(dòng)、體重和食量增加、毛色光澤柔潤(rùn)，情況均好于其他組;LK組與DK組情況相似，大便基本成形，毛色不光潔，活動(dòng)少，進(jìn)食量略增加，體重有所回升，偶見(jiàn)喜扎堆、拱背;MK

5、組情況最差，大便為黃色稀便、半稀便甚至血便，肛周污穢，背毛松散蓬亂，毛色偏黃無(wú)光澤，懶動(dòng)，反應(yīng)遲鈍，拱背，喜扎堆，食量明顯下降，體重下降，7天后體重逐漸回升，血便減輕或消失，仍存在稀便，食欲略好轉(zhuǎn)，毛色不光潔，有拱背、喜扎堆出現(xiàn)。
　　2疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)評(píng)分:與BK組相比，MK、DK、LK、GK組大鼠DAI評(píng)分均有所增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。BK(0.382±0.081)大鼠DAI評(píng)分未見(jiàn)明顯增高，MK(2.5

6、31±0.313)大鼠DAI評(píng)分顯著增高，兩組相比有顯著差異性(P＜0.05）。GK(0.495±0.128)、DK(1.687±0.144)、LK(1.692±0.225)組與MK組相比大鼠DM評(píng)分明顯降低，均有顯著性差異（P＜0.05）。與LK相比，GK大鼠DAI評(píng)分明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05); DK大鼠DAI評(píng)分無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。GK、DK之間進(jìn)行比較，大鼠DAI評(píng)分GK明顯低于DK，有顯著性差異(P＜0.

7、05)。
　　3結(jié)腸組織大體觀(guān)及粘膜損傷指數(shù)(CMDI)評(píng)分:肉眼觀(guān)察可見(jiàn)空白對(duì)照組腸粘膜光滑，未見(jiàn)充血、水腫、潰瘍以及腸壁增厚等。模型對(duì)照組可見(jiàn)腸粘膜水腫、潰瘍、糜爛、出血、結(jié)腸擴(kuò)張及腸壁增厚。泄?jié)峤舛痉礁邉┝拷M、低劑量組和柳氮磺胺吡啶組在給藥后，情況均較模型對(duì)照組減輕，與BK組大鼠相比，MK、DK、LK、GK組大鼠CMDI評(píng)分較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。與MK組相比，DK、LK、GK組大鼠CMDI評(píng)分均降低，差異有

8、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。與LK組相比，GK組大鼠CMDI評(píng)分降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); LK組大鼠CMDI評(píng)分與DK組相比，結(jié)果無(wú)顯著性差異(P＞0.05）。DK組、GK組之間進(jìn)行比較，GK組大鼠CMDI評(píng)分明顯低于DK組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。
　　4光鏡觀(guān)察:BK組大鼠鏡下結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)清晰，未見(jiàn)充血、水腫、糜爛及潰瘍，粘膜上皮細(xì)胞排列整齊，腸腺規(guī)整。與BK組相比，各組大鼠結(jié)腸粘膜炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度、上

9、皮完整度、腺體結(jié)構(gòu)等方面均有所改變，MK組結(jié)腸粘膜層缺失，粘膜下層有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，可見(jiàn)不同程度充血、水腫、糜爛及潰瘍形成，潰瘍?cè)畹撞靠梢?jiàn)急性血管炎等。經(jīng)藥物治療后，各治療組大鼠結(jié)腸粘膜病變均有不同程度的減輕，其中DK、LK組結(jié)腸潰瘍淺，粘膜糜爛、剝脫程度減輕，潰瘍旁上皮修復(fù)明顯，少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)隱窩、腸腺及間質(zhì)。GK組可見(jiàn)間質(zhì)無(wú)明顯充血水腫，腺管排列整齊，間質(zhì)散見(jiàn)少量炎性細(xì)胞，杯狀細(xì)胞豐富，恢復(fù)程度接近BK。
　　5血清IL-1

10、3、TLR4及MD2檢測(cè)結(jié)果:與BK組(58.9638±2.6158)相比，MK組(37.3388±1.0003)血清IL-13表達(dá)明顯降低，有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）;與MK組相比，GK組(53.1175±2.0330)、DK組(43.2775±3.6927)、LK組(43.9850±3.3698)血清IL-13表達(dá)均明顯升高，有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); GK組與LK、DK組相比，IL-13表達(dá)明

11、顯升高，有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); DK組與LK組比較，無(wú)顯著性差異（P＞0.05）（見(jiàn)Fig.4-1;Table3-1）。與BK組(0.1588±0.0030)相比，MK組(0.4427±0.1633)血清TLR4表達(dá)明顯增高，有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）;與MK組相比，GK組(0.2008±0.0028)、DK組(0.2367±0.0063)、LK組(0.2608±0.1469)大鼠血清中TLR4

12、明顯降低，有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); GK組與LK、DK組相比，TLR4表達(dá)明顯降低，有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); DK組與LK組比較，無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。(見(jiàn)Fig.4-2; Table3-2)與BK組(0.1075±0.0018)相比，MK組(0.3072±0.0060)血清MD2表達(dá)明顯增高，有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）;與MK組相比，GK組(0.1263±0.002

13、3)、DK組(0.2009±0.0062)、LK組(0.2003±0.0056)大鼠血清中MD2明顯降低，有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); GK組與LK、DK組相比，MD2表達(dá)明顯降低，有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); DK組與LK組比較，無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。(見(jiàn)Fig.4-3;Table3-3)
　　結(jié)論:
　　泄?jié)峤舛痉娇娠@著改善UC大鼠一般情況和結(jié)腸組織形態(tài)，減少UC大鼠疾病活動(dòng)指