溫腎健脾法對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織TLR-IL-1信號通路調(diào)控因子基因表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：采用“病-證”結(jié)合的方法制作脾腎陽虛型潰瘍性結(jié)腸炎動物模型，從分子和激素水平探討中醫(yī)“脾腎陽虛”證的現(xiàn)代科學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。采用溫腎健脾法代表方劑四神丸對大鼠進(jìn)行干預(yù)，通過觀察大鼠癥狀、結(jié)腸粘膜并檢測相關(guān)指標(biāo)，明確溫腎健脾法對UC的治療作用。觀察大鼠結(jié)腸組織中Toll樣受體/白細(xì)胞介素-1(TLR/IL-1)信號通路正、負(fù)性調(diào)控因子基因表達(dá)在給藥前后的變化，從而揭示溫腎健脾法防治潰瘍性結(jié)腸炎的部分作用機(jī)理。
　　方法：采用三硝基苯

2、磺酸灌腸，疊加番瀉葉灌胃、氫化可的松腹腔注射的方法建立脾腎陽虛型UC大鼠模型，給予四神丸進(jìn)行干預(yù)治療，用西藥柳氮磺胺嘧啶進(jìn)行對照。觀察大鼠的一般狀態(tài)和癥狀，結(jié)腸粘膜肉眼及光鏡觀察，并采用放射免疫(RIA)法檢測血清相關(guān)生化指標(biāo)如T、FT3、FT4、IgE、IL-2，對“病-證”結(jié)合動物模型進(jìn)行評判。采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)檢測大鼠結(jié)腸組織TLR/IL-1信號通路正、負(fù)性調(diào)控因子TLR4、IRAK-M、Tollip

3、mRNA的相對表達(dá)量。
　　結(jié)果：①動物模型評判指標(biāo)的結(jié)果：模型組大鼠癥狀積分顯著高于空白組(p<0.01)，結(jié)腸組織肉眼評分明顯高于空白組(p<0.01)；光鏡下顯示結(jié)腸粘膜有炎性細(xì)胞浸潤。模型組血清T、FT3、FT4、IL-2的表達(dá)均低于空白組，而IgE含量提高(p<0.01)；SOD含量低而MDA含量高(p<0.01)。②溫腎健脾法四神丸的治療作用：四神丸可有效改善UC癥狀和體征，癥狀積分較模型組降低(p<0.01)，結(jié)腸組

4、織肉眼評分明顯低于模型組(p<0.01)；光鏡下顯示結(jié)腸粘膜炎性細(xì)胞明顯減少。與模型組比較，四神丸組T、FT3、FT4、IL-2的表達(dá)均升高，而IgE含量下降(p<0.01)，SOD升高明顯(p<0.05)而MDA含量降低(p<0.05)。③TLR4、IRAK-M、Tollip mRNA：模型組大鼠結(jié)腸組織TLR4、Tollip mRNA陽性表達(dá)量較空白組處于較高水平(p<0.01)；經(jīng)藥物治療后，四神丸組與模型組相比TLR4、Toll

5、ip mRNA表達(dá)水平下降(p<0.01)。而空白組大鼠結(jié)腸組織IRAK-M mRNA表達(dá)較模型組處于較高水平(p<0.01)；經(jīng)藥物治療后，四神丸組與模型組相比，IRAK-M mRNA表達(dá)水平上升(p<0.01)。
　　結(jié)論：采用TNBS/乙醇溶液灌腸及番瀉葉灌胃、氫化可的松腹腔注射的方法可成功制作脾腎陽虛型UC大鼠模型，脾腎陽虛證的現(xiàn)代科學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)與機(jī)體免疫失衡、激素環(huán)境紊亂、下丘腦-垂體-腎上腺功能減退等有關(guān)。溫腎健脾法四神