接頭蛋白Nck影響FGF2誘導的細胞保護機制研究.pdf

1、神經(jīng)細胞死亡在各種神經(jīng)退行性疾病中是重要的病理特征,大量神經(jīng)細胞的死亡會導致神經(jīng)系統(tǒng)出現(xiàn)病變。在神經(jīng)系統(tǒng)病變狀態(tài)下研究其適應性和抵抗性具有非常重要的實際意義。神經(jīng)系統(tǒng)疾病,如神經(jīng)退行性疾病或腦缺血和內質網(wǎng)應激反應,具有一定的相關性,成纖維細胞生長因子2或堿性成纖維細胞生長因子(Fibroblastgrowthfactor2/Basicfibroblastgrowthfactor,FGF2/bFGF)是一種多效生長因子,在神經(jīng)系統(tǒng)中能夠促

2、進神經(jīng)前體細胞增殖和生長及誘導細胞分化。研究發(fā)現(xiàn),在腦受損后FGF2表達明顯增加,通過激活PI3K/AKT,ERK等信號通路促進神經(jīng)細胞的存活。FGF2是否影響內質網(wǎng)應激誘導的凋亡效應目前尚無相關報道。蛋白Nck是一種無催化活性的酪氨酸激酶的接頭蛋白,廣泛介導活化的受體酪氨酸激酶與下游靶蛋白之間的信號傳遞,但Nck在FGF2誘導的保護效應中的作用機制還有待進一步闡明。
　　本文以小鼠神經(jīng)干細胞C17.2為研究對象,利用衣霉素(Tu

3、nicamycin,TM/Tun)作為一種內質網(wǎng)應激反應化學誘導劑模擬病理條件,誘導細胞發(fā)生凋亡,進而針對FGF2對衣霉素誘導細胞凋亡的保護效應及Nck在該效應中扮演的角色進行研究。我通過檢測通路中相關蛋白發(fā)現(xiàn),FGF2顯著抑制了Tun誘導細胞凋亡蛋白PARP的剪切,但高表達Nck會拮抗FGF2的這種效應。FGF2促進AKT和ERK的活化,但高表達Nck對FGF2誘導的AKT和ERK存在不同的影響,表現(xiàn)在顯著抑制FGF2促AKT的活化,

4、但對ERK活化不存在顯著影響。當下調Nck時,FGF2促AKT活化的程度增加。高表達不同SH3結構域突變的Nck不改變FGF2促AKT活化的規(guī)律,表明Nck影響FGF2促AKT活化的效應依賴于SH3結構域的完整性。此外免疫沉淀結果表明,Nck與RasGAP之間存在組成性的相互作用,推測Nck借助與RasGAP的互作調節(jié)Ras和AKT的活性。
　　這些結果表明,FGF2對內質網(wǎng)應激下的神經(jīng)細胞具有明顯的保護效應,接頭蛋白Nck作為F