槲皮素-7-硫酸酯鈉的抗氧化活性及對MC3T3-E1成骨細胞增殖分化作用的研究.pdf

1、目的：槲皮素-7-硫酸酯鈉是通過磺化反應(yīng)人工半合成的水溶性槲皮素衍生物，我們的前期研究證實其體外有較強的抗氧化活性并對DNA氧化損傷有保護作用，本文進一步研究其體內(nèi)外抗氧化活性及對前成骨細胞MC3T3-E1細胞增殖分化的作用，為其將來藥用提供理論及實驗依據(jù)。
　　 方法：⑴不同濃度的槲皮素-7-硫酸酯鈉(Sodium quercetin-7-mono-sulfate，SQMS)組(0.1 mmol/L、0.25 mmol/L、0

2、.5 mmol/L)和維生素C(Vitamin C，VC)(0.25 mmol/L)對小鼠體外肝勻漿抗氧化的檢測，用試劑盒總抗氧化能力(Total antioxidantcapacity, T-AOC)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)和丙二醛(Malondialdehyde，MDA)進行相應(yīng)指標(biāo)的測試。⑵不同劑量的SQMS組(10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg)和VC組(200 mg

3、/kg)對小鼠連續(xù)灌胃6d，取血清、肝組織勻漿和心臟勻漿進行體內(nèi)抗氧化的測試，用試劑盒SOD、MDA進行相應(yīng)指標(biāo)的檢測。⑶槲皮素-7-硫酸酯鈉對小鼠前成骨細胞株MC3T3-E1增殖的作用在標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)條件下，將小鼠前成骨細胞株MC3T3-E1分組為空白組、槲皮素組(Quercetin, Que)(終濃度分別為1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)，不同濃度SQMS組(終濃度分別為1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L

4、);采用四甲基偶氮唑藍(MTT)方法檢測不同濃度的Que和SQMS對MC3T3-E1細胞增殖的影響。⑷在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件下，采用對硝基苯磷酸二鈉法(disodium4-nitrophenylphosphate，PNPP)檢測堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)活性，鈣離子含量、一氧化氮(Nitric oxide，NO)含量及一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase，NOS)活力、細胞中MDA和培養(yǎng)上

5、清MDA含量的檢測，用相應(yīng)的試劑盒進行測試;并對相關(guān)基因(Runx-2，Smad4，Tnfrsf11b，GSS，SOD1和SOD2)進行實時定量PCR(Real-Time PCR, RT-PCR)檢測。
　　 結(jié)果：①槲皮素-7-硫酸酯鈉的體外抗氧化活性實驗與空白組比較，VC組能顯著的升高T-AOC;SQMS低濃度組能升高T-AOC，但結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異，SQMS中和高濃度組能顯著升高T-AOC。VC組能增加SOD活性，但結(jié)果無統(tǒng)

6、計學(xué)差異，SQMS低和中劑量組能顯著升高SOD活力，SQMS高劑量組能增加SOD活力，但結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異。VC組能極顯著的降低MDA產(chǎn)生，SQMS的三個濃度也能顯著降低MDA產(chǎn)生。②槲皮素-7-硫酸酯鈉的體內(nèi)抗氧化活性實驗血清中各藥物組的MDA含量均無統(tǒng)計學(xué)差異;肝勻漿中的MDA含量在SQMS高劑量組中有下降的趨勢，但結(jié)果均無統(tǒng)計學(xué)差異;心臟勻漿中MDA含量在SQMS中和高劑量組中也有下降的趨勢，但結(jié)果均無統(tǒng)計學(xué)差異。SOD的測試結(jié)果表

7、明，血清中的SOD在VC、SQMS低和中劑量組中的活力有上升的趨勢，SQMS高濃度組有降低SOD活力，但結(jié)果均無統(tǒng)計學(xué)差異;肝勻漿中的SOD活力，除了SQMS中劑量組有升高外，其它組SOD活力均降低，結(jié)果無統(tǒng)計差異;心臟勻漿顯示各組都有升高SOD活力，但除了SQMS高劑量組升高SOD活力有顯著差異外，其它組結(jié)果均無統(tǒng)計學(xué)差異。③在標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)條件下，24 h時Que低和中濃度對MC3T3-E1有增殖的作用，但結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異，Que高濃度

8、組、SMQS三個濃度組能極顯著促進MC3T3-E1增殖;Que三個濃度組在48 h對MC3T3-E1有增殖作用，但結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異，SQMS三個濃度組對MC3T3-E1有顯著的增殖作用;Que低濃度組在72 h能增加MC3T3-E1增殖，但結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異，Que中和高濃度組和SQMS能極顯著增加MC3T3-E1增殖。④槲皮素-7-硫酸酯鈉對小鼠前成骨細胞株MC3T3-E1分化實驗在標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)條件下，MC3T3-E1給藥6d后，各組的A

9、LP活力無明顯變化;給藥9d后，SQMS中和高濃度組能明顯升高ALP活力;給藥12d，SQMS低、中和高濃度有升高ALP活力的作用，但結(jié)果均無統(tǒng)計學(xué)差異，Que組無升高ALP活力。給藥9d，Que組對鈣離子含量有升高的作用，但結(jié)果均無統(tǒng)計學(xué)差異，SQMS低、中和高濃度組有極顯著升高鈣離子含量的作用;給藥12 d，各用藥組均無升高鈣離子含量的作用。給藥48 h和72 h后，所有藥物組有明顯升高NOS活力的作用;Que無明顯增加NO含量，S

10、QMS低和中濃度組有明顯抑制NO含量，SQMS高濃度組對NO含量無明顯作用;所有藥物組對細胞中MDA含量生成都有增加作用，但結(jié)果均無統(tǒng)計學(xué)差異;Que對細胞培養(yǎng)上清中MDA含量產(chǎn)生有明顯抑制作用，SQMS各組對細胞培養(yǎng)上清中MDA含量產(chǎn)生有抑制作用，但結(jié)果均無統(tǒng)計學(xué)差異;給藥72 h后，Que有顯著升高NOS活力作用，SQMS各組有極顯著升高NOS活力作用;Que和SQMS高濃度組無明顯增加NO含量，SQMS低和中濃度組有顯著抑制NO產(chǎn)

11、生;各組藥物均有增加細胞中MDA含量，但結(jié)果均無統(tǒng)計學(xué)差異;Que有顯著降低細胞培養(yǎng)上清中MDA含量，SQMS各組對細胞培養(yǎng)上清中MDA含量無明顯作用。
　　 結(jié)論：⑴SQMS可提高體外肝組織勻漿T-AOC、增加SOD活力、降低MDA含量和提高體內(nèi)心肌組織SOD活力的作用，進一步證實其具有較高抗氧化活性。⑵SQMS能顯著促進MC3T3-E1細胞增殖和分化，其促增殖分化作用與其降低MDA含量，增加NOS活性，促進GSS基因的表達有