柚皮苷對(duì)成骨細(xì)胞系MC3T3-E1和小鼠顱頂骨骨形成的作用研究.pdf

1、骨組織工程中運(yùn)用各種生物因子及支架研究骨代謝過程中的骨形成及骨吸收成為當(dāng)下科學(xué)研究及臨床關(guān)注的重點(diǎn)。鑒于現(xiàn)有臨床藥物在骨改建過程中促骨形成時(shí)的副作用，植物源性促骨形成藥物成為當(dāng)下科研焦點(diǎn)，然而研究藥物對(duì)單一離體細(xì)胞分化成骨作用并不能為藥物的臨床使用提供有力的證據(jù)。本實(shí)驗(yàn)擬研究骨碎補(bǔ)主要活性物質(zhì)-柚皮苷對(duì)成骨細(xì)胞系MC3T3-E1的促骨形成作用，同時(shí)選擇藥物與顱頂骨器官建立共培養(yǎng)模型，運(yùn)用Micro-CT掃描技術(shù)分析藥物對(duì)系列骨細(xì)胞（骨細(xì)

2、胞、成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞）、骨基質(zhì)等共存下的顱頂骨器官骨形成的作用。
　　目的：
　　1.在分析區(qū)域包含整個(gè)顱頂骨的前提下，改變Micro-CT掃描后二維圖像的重建層數(shù)或者位置，比較進(jìn)行重建后的骨量參數(shù)(骨表面積、骨體積)是否出現(xiàn)改變。
　　2.分析柚皮苷對(duì)成骨細(xì)胞系MC3T3-E1和顱頂骨骨形成的作用。
　　方法：
　　1.Micro-CT掃描4日齡CD-1小鼠顱頂骨，三維重建時(shí)改變空白分析區(qū)域?qū)訑?shù)或位置來

3、分別分析：
　?、?96～22層組與800～50層組，分析層數(shù)不同；
　　②996～22層組與隨機(jī)選擇層組，分析層數(shù)不同；
　?、劢吔缟暇壗M與近邊界下緣組，分析層數(shù)相同的骨量參數(shù)變化。
　　2.不同濃度柚皮苷作用于MC3T3-E1后通過CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞生長、定量分析細(xì)胞分泌蛋白ALP、RT-PCR法檢測(cè)MC3T3-E1細(xì)胞RUNX2、OCN和OPN基因mRNA表達(dá)量、茜素紅染色柚皮苷作用下細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)形成。

4、
　　3.不同濃度柚皮苷作用于顱頂骨后通過Micro-CT掃描分析顱頂骨骨量參數(shù)（骨表面積、骨體積）的變化。
　　結(jié)果：
　　1.在分析區(qū)域包含整個(gè)顱頂骨的前提下：
　?、僭黾踊蛘邷p少空白分析層數(shù)會(huì)導(dǎo)致顱頂骨骨表面積變化，而骨體積無變化。
　?、陔S機(jī)選擇層數(shù)組與996～22層數(shù)組分析比較時(shí)顱頂骨骨表面積、骨體積均有變化。
　　③重建層數(shù)相同的前提下，改變分析區(qū)域位置時(shí)顱頂骨骨表面積、骨體積無變化。

5、r>　　2.不同濃度柚皮苷（0mg/L、1mg/L、10mg/L）均可促進(jìn)MC3T3-E1的RUNX2、OCN、OPN表達(dá)上調(diào)及細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)形成，但1mg/L濃度柚皮苷促成骨作用較10 mg/L組顯著。
　　3.不同濃度柚皮苷作用的離體培養(yǎng)顱頂骨骨表面積和骨體積無明顯變化。
　　結(jié)論：
　　1.柚皮苷可促體外培養(yǎng)MC3T3-E1細(xì)胞成骨向分化，而對(duì)體外培養(yǎng)顱頂骨骨形成無明顯作用。
　　2.Micro-CT三維重建