金絲桃苷通過(guò)BMP和Wnt-β-catenin信號(hào)通路調(diào)控成骨細(xì)胞MC3T3-E1增殖分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究金絲桃苷對(duì)成骨細(xì)胞MC3T3-E1的增殖、分化的影響及其作用的分子機(jī)制。
　　方法：用不同濃度的金絲桃苷作用于成骨細(xì)胞MC3T3-E1，分為五個(gè)組，依次為分別含有10μmol/L，20μmol/L，40μmol/L，80μmol/L濃度金絲桃苷的實(shí)驗(yàn)組及不含金絲桃苷的空白對(duì)照組。用MTT法、p-NPP法以及茜紅素染色法分別對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞的增殖率、堿性磷酸酶活性以及細(xì)胞的礦化結(jié)節(jié)進(jìn)行檢測(cè)。用RT-PCR法檢測(cè)MC3

2、T3-E1細(xì)胞成骨分化相關(guān)基因ALP、Col-I、OPN、BMP2、Runx2、Osx、β-catenin及LRP5的表達(dá)，用Western Blot法檢測(cè)MC3T3-E1細(xì)胞成骨分化相關(guān)蛋白BMP2和β-catenin的表達(dá)，最后通過(guò)SPSS軟件統(tǒng)計(jì)分析金絲桃苷促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和分化的作用。
　　結(jié)果：MTT結(jié)果顯示，10μmol/L，20μmol/L，40μmol/L，80μmol/L濃度的金絲桃苷作用24h-72h均能促進(jìn)M

3、C3T3-E1細(xì)胞增殖。金絲桃苷作用3d，能明顯促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞堿性磷酸酶的活性，作用17d能明顯促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)的表達(dá)，均具有濃度依賴性，以40μmol/L濃度的金絲桃苷作用最明顯。RT-PCR結(jié)果顯示，金絲桃苷可促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞ALP、Col-I、OPN、BMP2、Runx2、Osx、β-catenin及LRP5基因的表達(dá)，Western Blot結(jié)果顯示金絲桃苷促進(jìn)BMP2和β-catenin的蛋白