2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:近年來許多研究表明,一種叫G蛋白偶聯(lián)受體30(G protein-coupledreceptor30,GPR30),又稱G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(G protein coupled estrogenreceptor,GPER),作為一種新型的雌激素模型受體,可能參與介導了雌激素快速非基因組轉錄反應[1]。GPER廣泛參與骨骼系統(tǒng)、生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等多臟器的生理調節(jié)[2-4],所以GPER將是疾病治療的新的靶點。線粒體主要為細胞

2、供能,在活性氧等刺激下會引起線粒體損傷,從而引起細胞死亡。線粒體自噬是清除損傷線粒體的特異性的過程,本研究旨在討論GPER對MC3T3-E1細胞線粒體自噬的影響及其分子機制,為治療骨質疏松提供新的干預靶標和研究策略。
  方法:外源性17β-E2作用體外培養(yǎng)的MC3T3-E1細胞,Western blot方法檢測細胞內(nèi)GPER的蛋白表達;應用免疫熒光技術觀測TOM20及LAMP-2蛋白活性;外源性17β-E2、GPER抑制劑(G1

3、5)、自噬抑制劑(3-MA)和PLC通路抑制劑(U73122)分別或聯(lián)合作用MC3T3-E1細胞,應用鈣熒光方法證明細胞線粒體內(nèi)自噬的發(fā)生,應用Western blot方法檢測活化的GPER調節(jié)PLC信號通路關鍵蛋白磷酸化水平及線粒體自噬相關蛋白Tom20、LC3、Beclin-1的表達。
  結果:⑴外源17β-E2(10-9M、10-8M、10-7M)增強MC3T3-E1細胞內(nèi)GPER的蛋白表達,10-7M外源性17β-E2增

4、強GPER表達最明顯;給予最適濃度17β-E2刺激后GPER蛋白于24h,GPER表達最明顯;自噬抑制劑(3MA)或GPER抑制劑(G15)可以明顯抑制17β-E2正性調節(jié)GPER蛋白表達的作用;⑵10-7M外源性17β-E2可以明顯地增強MC3T3-E1細胞內(nèi)的Beclin-1、TOM20及LAMP-2蛋白活性,而G15或3-MA可以抑制此效應;⑶10-7M外源性17β-E2可以明顯地減少MC3T3-E1細胞內(nèi)的自噬相關蛋白LC3-Ⅱ

5、/LC3-1的蛋白活性,而G15或3-MA可以抑制此效應;⑷10-7M外源性17β-E2可以明顯地增強MC3T3-E1細胞內(nèi)鈣離子濃度,而G15或3-MA可以抑制此效應;⑸10-7M外源性17β-E2可以明顯地增強MC3T3-E1細胞內(nèi)的PLC信號蛋白活性,PLC通路抑制劑U73122可以抑制此效應。
  結論:17β-E2可以通過17β-E2/GPER/PLC信號通路干預線粒體自噬標志蛋白TOM20、Beclin-1及LAMP-

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