吡格列酮對正常MC3T3-E1成骨細(xì)胞增殖、凋亡以及功能蛋白表達的影響.pdf

1、目的：研究不同濃度吡格列酮(PIO)對正常糖濃度培養(yǎng)下MC3T3-E1小鼠早期成骨細(xì)胞增殖、凋亡及功能蛋白分泌表達變化的影響，并了解其可能發(fā)生機制，為臨床用藥提供一定實驗參考及依據(jù)。
　　 方法：應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)MC3T3-E1細(xì)胞，將實驗分為正常對照組、5μmol/L PIO組、10μmol/L PIO組、20μmol/L PIO組、40μmol/L PIO組，藥物分別干預(yù)不同時間(24、48小時)。CCK-8法檢測細(xì)胞增

2、殖能力；Annexin V-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)定量檢測細(xì)胞的凋亡情況；放射免疫法和酶聯(lián)免疫分析法分別檢測骨鈣素(OCN)和堿性磷酸酶(ALP)的分泌變化；半定量RT-PCR法檢測過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)、runt家族相關(guān)基因2(Runx2)和骨形成蛋白-2(BMP-2)mRNA的表達情況。
　　 結(jié)果：PIO作用于MC3T3-E1細(xì)胞后：
　　 1.與對照組比較，MC3T3-E1細(xì)胞增殖能力

3、在5μmol/L PIO干預(yù)組增加顯著(P<0.05)，在PIO≥10μmol/L則降低(P<0.05)。干預(yù)時間由24h延長至48h，各組細(xì)胞增殖能力呈不同程度增加，但在20、40μmol/L PIO干預(yù)的兩組增加無統(tǒng)計學(xué)差別。
　　 2.對照組及各PIO濃度干預(yù)組中，細(xì)胞凋亡率呈現(xiàn)先下降后增加的趨勢，各組細(xì)胞凋亡率分別為：1.97[％]、0.43[％]、13.0[％]、48.30[％]、81.00[％]；
　　 3.

4、隨著PIO濃度從0～40μmol/L范圍內(nèi)的增加，MC3T3-E1細(xì)胞的PPARγmRNA表達水平呈增加趨勢；Runx2 mRNA表達量在5μmol/L PIO濃度組時較對照組增加，在劑量較高時(PIO≥10μmol/L)隨濃度升高表達下降。
　　 4.細(xì)胞功能蛋白ALP、OCN的分泌及BMP-2的表達在5μmol/L PIO濃度組時最高，PIO≥10μmol/L時，上述蛋白量逐漸下降(P<0.05)；隨干預(yù)時間從24～48小時

5、延長，各PIO濃度干預(yù)組ALP以及BMP-2量增加(P<0.05)，而OCN無顯著改變(P>0.05)。
　　
　　 結(jié)論：
　　 1 吡格列酮對正常糖濃度培養(yǎng)的MC3T3-E1小鼠早期成骨細(xì)胞存在雙向作用：在一定濃度(5μmol/L)可抑制細(xì)胞凋亡，促進細(xì)胞增殖及相關(guān)功能蛋白表達和分泌；劑量較高時(≥10μmol/L)則明顯促進細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖及功能；
　　 2 正常糖濃度下，吡格列酮能激活PP