p27kip1半量敲除促進血管新生與細胞保護改善心梗預后.pdf

1、p27kip1(p27)與p21cip1(p21)、p57kip2(p57)共同組成cip/kip家族參與對細胞周期調控。其中，對于p27的研究廣泛涉及生血管、免疫、腫瘤等各方面，并且早已成為研究細胞生存狀態(tài)下代謝與衰老、增殖與凋亡等各方面的重要途徑。然而，雖然p27作為細胞周期調控蛋白廣泛存在于真核生物細胞內，且尤以心肌細胞等終末分化細胞表達為甚，但是其對心肌缺血后組織保護再生作用與機制研究甚少。心梗后NF-κB途徑的激活，成為早期炎

2、癥與生存途徑的關鍵調控因素。
　　本研究擬證明p27敲降對心梗預后存在直接與間接關聯(lián)。首先在心超檢測與生存率分析中，我們使用左前降支（LAD）結扎模擬小鼠心梗模型發(fā)現p27基因敲除小鼠(p27-/-)在心梗早期死亡率遠遠高于WT與單基因表達（p27+/-）組，而p27+/-組體現出強大的心功能預后能力。為研究其機制，我們通過在體與離體實驗檢測并發(fā)現了p27+/-心功能的改善與梗死后新生血管的作用密切相關。我們通過免疫熒光血管染色(

3、IB4)與Masson染色及TUNEL凋亡試劑盒檢測發(fā)現，p27+/-小鼠表現出強大的梗死后血管再生能力和與其相匹配的細胞抗凋亡能力與活力。離體細胞實驗中，我們采用了p27慢病毒轉染敲降大鼠心肌H9c2細胞，研究中模擬心肌缺血缺氧環(huán)境后發(fā)現其抗凋亡與促血管新生功能機制與p27敲降后NF-κB途徑激活、下游肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）、血管內皮生長因子(vascular endothelial

4、 growth factor，VEGF)等促血管生成因子的分泌增加有著密切聯(lián)系。為了證明機制的相關性，我們進一步采用了交互免疫共沉淀證明p27、IKK在心肌細胞中相互綁定。同時證實IKKi以及IKK阻滯劑ACHP可逆轉p27敲降心肌細胞HGF、VEGF分泌能力，更進一步證明了內源性p27下降所導致的血管新生與NF-κB途徑激活繼而分泌增加的HGF、VEGF存在直接關聯(lián)。而采取上清條件培養(yǎng)與抗體中和試驗證明了p27敲降可使心肌HGF、VE